原理：40细胞进行融合时，培养液中只有部分细胞融合成杂种细胞，还有大量未融合的双亲细胞。这就需要选择分离纯化杂种细胞为此要创造一种只让杂种细胞生长繁殖而亲本细胞死亡的环境。这就要利用杂种细胞和亲本细胞对生长条件的要求和代谢的差异来进行选择。其中最常用的是HAT选择系统
6 ⚫ 4）原理： 细胞进行融合时，培养液中只有部分细 胞融合成杂种细胞，还有大量未融合的双 亲细胞。这就需要选择分离纯化杂种细胞。 为此要创造一种只让杂种细胞生长繁殖而 亲本细胞死亡的环境。这就要利用杂种细 胞和亲本细胞对生长条件的要求和代谢的 差异来进行选择。其中最常用的是HAT选择 系统
HAT选择系统：人的突变细胞株：缺乏HGPRT酶小鼠细胞株：缺乏TK酶两者融合培养于HAT培养基中HAT培养基：H为次黄嘌呤，是HGPRT的底物，为DNA合成提一供原料（核苷酸旁路合成原料）A可阻断正常的DNA合成（嘌岭及TMP合成受抑制)T在胸激酶（TK）的作用下生成胸腺嘧啶核苷酸，为DNA合成提供原料
7 HAT选择系统： 人的突变细胞株：缺乏HGPRT酶 小鼠细胞株：缺乏TK酶 两者融合培养于HAT培养基中 HAT培养基： H为次黄嘌呤，是HGPRT的底物，为DNA合成提 供原料（核苷酸旁路合成原料） A可阻断正常的DNA合成（嘌呤及TMP合成受抑 制） T在胸苷激酶（TK）的作用下生成胸腺嘧啶核 苷酸，为DNA合成提供原料
因此在HAT培养基上、人细胞：合成通路受①由于A的存在，正常的DNA阻。②同时由于HGPRT的缺乏，无法利用次黄嘌岭通过旁路合成DNAA（嘌呤合成障碍
8 因此在HAT培养基上 ⚫ 人细胞： ①由于A的存在，正常的DNA 合成通路受 阻 。 ②同时由于HGPRT的缺乏，无法利用次黄 嘌呤通过旁路合成DNA（ 嘌呤合成障碍）
鼠细胞：日由于A的存在正常的DNA合成通道受阻，不有HGPRT可以利用次黄岭合成腺嘌呤，鸟嘌呤，但由于无TK，无法合成胸腺嘧啶。（嘧啶合成障碍杂种细胞：有HGPRT旁路合成腺嘌呤，鸟(嘌嘌呤；并可以利用TK合成胸腺嘧啶呤和嘧啶都可以正常合成
9 ⚫ 鼠细胞：由于A的存在正常的DNA合成通 道受阻，有HGPRT可以利用次黄嘌呤合成 腺嘌呤，鸟嘌呤，但由于无TK，无法合 成胸腺嘧啶。（嘧啶合成障碍 ） 杂种细胞：有HGPRT旁路合成腺嘌呤,鸟 嘌呤；并可以利用TK合成胸腺嘧啶（嘌 呤和嘧啶都可以正常合成）
将筛选出来的杂种细胞转移到正常培养基继续培养，由于人和鼠都有各自不同的生化和免疫学特性，Miller等运用体细胞杂交并结合杂种细胞的特征，证明杂种细胞的存活需要胸苷激酶（TK）。凡是含有人17号染色体的杂种细胞都因有TK活性而存活，反之则死亡，从而推断TK基因定位于17号染色体上，这是首例应用体细胞杂交法进行的基因定位。O
10 ⚫ 将筛选出来的杂种细胞转移到正常培 养基继续培养，由于人和鼠都有各自不同 的生化和免疫学特性，Miller等运用体细 胞杂交并结合杂种细胞的特征，证明杂种 细胞的存活需要胸苷激酶（TK）。凡是含 有人17号染色体的杂种细胞都因有TK活性 而存活，反之则死亡，从而推断TK基因定 位于17号染色体上，这是首例应用体细胞 杂交法进行的基因定位