微丝染色及形态观察[自的要求]1.掌握微丝的染色方法2.了解光镜下微丝的基本形态结构3.了解细胞松弛素B对微丝的作用及原理
[目的要求] 1. 掌握微丝的染色方法。 2. 了解光镜下微丝的基本形态结构。 3. 了解细胞松弛素B对微丝的作用及原理。 微丝染色及形态观察
[实验原理真核细胞质中纵横交错的纤维网称为细胞骨架，在维持细胞形状和运动方面具有重要作用。根据组成成分和组装结构的不同，可将细胞骨架分为微管、微丝和中间纤维。微丝普遍存在于多种细胞，对细胞的形状和运动有一定作用。微丝由蛋白单体聚合形成，细胞松驰素B可与微丝的亚单位肌动蛋白结合，从而破坏微丝，改变细胞的形状。细胞松弛素B对微丝的作用具有可逆性
[实验原理] 真核细胞质中纵横交错的纤维网称为细胞骨架，在 维持细胞形状和运动方面具有重要作用。根据组成成 分和组装结构的不同，可将细胞骨架分为微管、微丝 和中间纤维。微丝普遍存在于多种细胞，对细胞的形 状和运动有一定作用。微丝由蛋白单体聚合形成，细 胞松驰素B可与微丝的亚单位肌动蛋白结合，从而破 坏微丝，改变细胞的形状。细胞松弛素B对微丝的作 用具有可逆性
当细胞用TritonX-100溶液处理，能够溶解质膜结构中及细胞内许多蛋白质，而细胞骨架中的蛋白质却不被破坏，经固定和考马斯亮蓝（非特异性蛋白质染料）染色后，胞质背景着色弱，微管等蛋白结构在光镜下无法分辨，在光镜下观察到主要是由微丝组成的应力纤维。应力纤维由平行排列的微丝组成，体外培养的贴壁细胞应力纤维尤为发达，形态长而直，常与细胞长轴平行并贯穿细胞全长
当细胞用TritonX-100溶液处理，能够溶解质 膜结构中及细胞内许多蛋白质，而细胞骨架中的 蛋白质却不被破坏，经固定和考马斯亮蓝（非特 异性蛋白质染料）染色后，胞质背景着色弱，微 管等蛋白结构在光镜下无法分辨，在光镜下观察 到主要是由微丝组成的应力纤维。 应力纤维由平行排列的微丝组成，体外培养的 贴壁细胞应力纤维尤为发达，形态长而直，常与 细胞长轴平行并贯穿细胞全长
微丝在细胞内的分布特征
微丝在细胞内的分布特征
[实验用品】器具：CO.恒温培养箱、倒置显微镜、超净工作台低速离心机、普通光学显微镜、移液器、恒温箱、镊子、培养皿、载玻片、盖玻片、吸水纸材料：盖玻片培养的成纤维细胞试剂：6mmol/LPBS（pH6.5）、1%TritonX-100溶液、M-缓冲液、3%戊二醛固定液、0.2%考马斯亮蓝染液、100μg/ml的细胞松弛素B、DMEM培养液
[实验用品] ◼ 器具：CO2恒温培养箱、倒置显微镜、超净工作台、 低速离心机、普通光学显微镜、移液器、恒温箱、 镊子、培养皿、载玻片、盖玻片、吸水纸。 ◼ 材料：盖玻片培养的成纤维细胞 ◼ 试剂：6 mmol/L PBS（pH 6.5）、1％TritonX-100 溶液、M-缓冲液、3％戊二醛固定液、0.2％考马斯 亮蓝染液、100μg /ml的细胞松弛素B、DMEM培养 液