CHO (4)(CHOH)4 HO CH,OH (CH3)2N N+(CH3)2CI COOH (CHOH)4 +HCI CH,OH (CH3)2N N(CH3)2 从上述反应式可知,1mol葡萄糖可以将6 mol cu2还原为Cu。实际上两者 之间的反应并非那么简单。实验结果表明,lmol葡萄糖只能还原5mo多点的 Cu2,且随反应条件而变化。因此,不能根据上述反应式直接计算出还原糖含量, 而是用已知浓度的葡萄糖标准溶波标定的方法,或利用通过实验编制出的还原糖 检索表来计算。在测定过程中要严格遵守标定或制表时所规定的操作条件,如热 源强度(电炉功率)、锥形瓶规格、加热时间、滴定速度等。 三、试剂 1.碱性酒石酸铜甲液:称取15g硫酸铜( Cuso·5H0)及0.05g次甲基蓝 溶于水中并稀释到1000ml。 2.碱性酒石酸铜乙液:称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠,溶于水中, 再加入4g亚铁氰化钾,完全溶解后,用水稀释至1000ml,贮存于橡皮塞玻璃瓶 中 3.乙酸锌溶液:称取21.9乙酸锌(Zn( CHCOO)2·2H0),加3ml冰醋酸,加 水溶解并稀释到100ml。 4.10.6%亚铁氰化钾溶液:称取10.6g亚铁氰化钾[KFe(CN)6·3HO],溶于 水中,稀释至100m1 5.0.1%葡萄糖标准溶液:准确称取1.0000经过98-100℃千燥至恒重的无 水葡萄糖,加水溶解后移入1000m容量瓶中,加入5ml盐酸(防止微生物生长), 用水稀释到1000m1。 四、测定方法 1.样品处理 取适量样品,按本章第二节中的原则对样品进行提取,提取液移入250ml 容量瓶中,慢慢加入5ml乙酸锌溶液和5ml亚铁氰化钾溶液,加水至刻度,摇 匀后静置30分钟。用干燥滤纸过滤,弃初滤液,收集滤液备用
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2.碱性酒石酸铜溶液的标定 准确克取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml,置于250m锥形瓶中,加水10m, 加玻璃珠3粒。从滴定管滴加约σml葡萄糖标准溶液,加热使其在2分钟内沸腾 准确沸腾30秒钟,趁热以每Σ秒Ⅰ滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液,直至溶 液蓝色刚好褪去为终点。记录消耗葡萄糖溶液的总体积。平行操作3次,取其平 均值,按下式计算。 F=c×V 式中:F-—10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量,mg c——葡萄糖标准溶液的浓度,mg/ml Ⅴ——一标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积,ml 3样品溶液预测 吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各500m,置于250ml锥形瓶中,加水10m, 加玻璃珠3粒,加热使其在2分钟内至沸,准确沸腾30秒钟,趁热以先快后慢 的速度从滴定管中滴加样品溶液,滴定时要始终保持溶液呈沸腾状态。待溶液蓝 色变浅时,以每2秒1滴的速度滴定,直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录样品 液消耗的体积 4样品溶液测定 克取碱性酒石酸铜甲液及乙液各500n,置于250m锥形瓶中,加玻璃珠3 粒,从滴定管中加入比预测时样品溶液消耗总体积少lm的样品溶液,加热使其 在2分钟内沸腾,准确沸腾30秒钟,趁热以每2秒1滴的速度继续滴加样液, 直至蓝色刚好褪去为终点。记录消耗样品溶液的总体积。同法平行操作3份,取 平均值。 五、结果计算 F 还原糖(以葡萄糖汁%) 100 000 式中:m——样品质量,g; F——10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量,mg V——测定时平均消耗样品溶液的体积,m1 250—样品溶液的总体积,ml
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实验七淀粉含量的测定 、原理 淀粉测定可先除去样品中的脂肪及其中的可溶性糖、再在一定酸度下,将淀 粉水解为具有还原性的葡萄糖。通过对还原糖含量的测定,乘上一换算系数09, 即为淀粉含量,反应式如下 (C6H10O5)n+nH2O→→nC6H10O6 n×162.1 n×180.2 根据反应公式,淀粉与葡萄糖之比为: l621:180.12=09:1,162.1÷180.12=0.9即0g淀粉水解后可得lg葡萄 糖。淀粉水解后可得1g葡萄糖。 、材料、仪器与试剂 一)材料:马铃薯、苹果、葡萄等。 (二)仪器:滴定管(15ml)、移液管(5ml)、烧杯、三角瓶(I50m)、容量瓶 (500ml,25oml,l0oml)、漏斗、硏钵、酒精灯、铁架台、滴定管夹、水浴锅、分 析天平 三)试剂:硫酸铜、酒石酸钾钠、氢氧化钠、盐酸、次甲基蓝、醋酸铅、硫 酸钠、酚酞。 1.菲林试剂甲:称取硫酸铜34639g加入蒸馏水溶解后,置于500ml容量 瓶中,加水稀释到刻度,混匀。 2.菲林试剂乙:称取酒石酸钾钠173g及氢氧化钠50g,加蒸馏水溶解后置 于500ml容量瓶中,加水稀释到刻度,混匀,过滤后待用。 3.蔗糖标准液的配制:用分析天平准确称取1g蔗糖,溶解后移入250ml 容量瓶中定容,混匀后吸取50m放入100ml容量瓶中,加2.5ml12 mol/L HCI, 在沸水中煮10min,取出迅速用冷水冲洗冷却至室温,加1%酚酞2-3滴,加6mol/L NaOH中和至微红,定容,混匀,用此标准液滴定菲林试剂,求出标准蔗糖液 lm中蔗糖含量。 三、操作步骤 一)样品处理:称去皮切碎的苹果肉2g,置研钵中磨成匀浆,用蒸馏水冲
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洗转移入100ml容量瓶中,加2.5ml12 mol/L HCl在沸水浴中煮10min,取出冷 却,此时样品中的蔗糖水解成还原糖。对含蛋白质较多的样品,可滴加 10%Pb(Ac到溶液不再产生白色絮状沉淀时为止,加饱和Na2SO4除去多余的铅 离子,然后加1%酚酞2-3滴,加6 mol/L Naoh中和至微红,定容到100m,摇 匀后过滤待测。 (二)测定:吸取5ml菲林试剂甲和5ml菲林试剂乙,放入150ml的三角瓶 中。加入1-2滴次甲基蓝,置酒精灯上加热至沸腾,用竹制试管夹夹住三角瓶, 边摇动边滴定,真至样品提取液将菲林试剂滴定至上清液变为无色(同时出现红 棕色的氧化亚铜沉淀)记录下样品滴定用量的毫升数,重复一次,求两次读数的 平均值为样品滴定用量。 四、计算 标准蔗糖lm中含糖量×滴定用量(样品液) 淀粉(%) ×稀释倍数×100×0.9 样品重量×103 五、注意事项 (一)如样品含糖量高时需适当加大稀释倍数 (二)掌握滴定终点标准时,需用白色做背景,便于观察溶液从蓝色转变为 无色,且必须在沸腾时观察,否则易氧化成蓝色不易判别终点。 (三)总糖的测定亦可用此法,但需用HCl将多糖水解,转化成还原糖并 适当稀释后测 (四)样品中含有可溶性糖时,可先用乙醇溶解除去可溶性糖再测淀粉含量。 实验八淀粉含量的测定 (碘量法) 、原理 淀粉是食品中主要的组成部分,也是植物种子中重要的贮藏性多糖。由于淀 粉颗粒可与碘生成深蓝色的络合物,故可根据生成络合物颜色的深浅,用分光光 度计测定消光度而计算出淀粉的含量 、材料、仪器与试剂 (一)材料:马铃薯、栗子、山药等。 )仪器:分光光度计、小台秤、分析天平、烧杯(l00ml)、研钵、容量瓶 (10om1)、洗瓶、漏斗、滤纸、具塞刻度试管(l5ml)、恒温水浴、移
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液管(lm,2m)。 (三)试剂 1.碘液:称取2000g碘化钾,加5oml蒸馏水溶解,再用小台秤迅速称取 碘20g,置烧杯中,将溶解的KI溶液倒入其中,用玻棒搅拌,直到碘完全溶解, 若碘不能完全溶解时,可再加少许固体碘化钾即能溶解,碘液贮存在棕色小滴瓶 中待用,用时稀释50倍。 2.乙醚。 3.10%乙醇 三、操作步骤 一)标准曲线的制作:用分析天平准确称取100g精制马铃薯淀粉,加入 5onl蒸馏水制成匀浆,逐渐倒λφoml左右沸腾的蒸馏水中,边倒边搅拌,即 得澄清透明的糊化淀粉溶液,置l00n容量瓶中,用少量蒸馏水冲洗烧杯。定容, 此淀粉溶液浓度为l0mgml(A液)。吸取A液2.0m置100m容量瓶,定容, 此时淀粉浓度为200μg/ml(B液)。取具塞刻度试管8支,按下表加入淀粉及碘 液,再加蒸馏水使每支试管溶液补足到l0m,摇匀,待蓝色溶液稳定10mi后, 用分光光度计于660nm波长处测其消光值。以消光值为纵坐标,已知淀粉溶液 的浓度为横坐标绘制标准曲线 试管编号1234678 标准淀粉溶液 00.51.01.5202.53.04.0 [(200ug/ml)mll 碘液(ml) 0.20.20.20.20.20.20.20.2 蒸馏水(ml) 989.38.88.3787.36.85.8 淀粉含量(μg/mD 100200300400500600800 二)样品处理:马铃薯洗浄,去皮,用擦子擦成碎丝,迅速称取马铃薯碎丝 300g,置硏钵中磨成匀浆。将匀浆转移到漏斗中,用乙醚50m分5次洗涤,再 用10%乙醇洗涤3次,以除去样品中的色素,可溶性糖及其它非淀粉物质,然后 将滤纸上的残留物转移到100m烧杯中,用蒸馏水分次将滤纸上的残留物全部洗 入烧杯,将烧杯置沸水浴中边搅拌边加热,直到淀粉全部糊化成澄清透明。将此 糊化淀粉转移到l00n容量瓶中,定容,混匀(C液)。 (三)测定:吸取C液20ml,置l000n容量瓶中,用蒸馏水定容,混匀 准确吸取2ml样品溶液(吸取量依样品中淀粉浓度而变),置15m具塞刻度试 管,加入碘液02m,直至溶液呈现透明蓝色,用蒸馏水补足到l0m,混匀,静 置omin,于660nm波长处测定消光值。由标准曲线查出样品中淀粉含量(g/0g 鲜重)。 四、计算
Mª ' ' àá b.MÔ¥= . ¢Á ' (moÄ¢Ðiáýä¥= . ¢§$Z^¢¤oÄ %3 oMþóF^¢%'-.¢8.+ÎoÄ¢ ·.µi+ÎoÄÏ¢nÐÁï. ioÄ¢.M¶¢®îi$ß ^ñ¢ÏÇh ï bj b jk ?LQR@~ÔdÝÞLù¥= ø@qÞL*+¢Áó ' (m@ðE¢þó ' _`CÐ(m^¢ìþì-.¢ ve¯B *+oM¢§ ' ß^¢ (mèë$Z ¢ p*+oMR¬ '(' Mþ= M ' § ' ߢ ¢ pÏ*+R¬ 9(' " M=¸nઠ¢´;Áó*+C. M¢ÐÁ(mjàªoM8 ' ¢oð¢ñtoMõ ' 5 ¦¢ ¨ 5' 9ÈF?I³?I¬| ?¢*+oM R¬} ?P@?LQR à ª ¢ ?L*+oM : 9(' ' ; .M ' (m ' *+, 9(' ºÈÔqÞLë좪¢  îN¢ä¥=qÞLîN ¢§[\^lðE¤ðEé>8_`^¢j ' ë ¢Ð jkë ¢³æªº^{¢noj(CF/é*+¾P¢÷¦ ¤ay¹()¾é>8 ' $Z^¢(m¤ay¹()¾Îêë ó$Z¢¤$Z§C+^ì-.ìÁ¢8*+ÎêB e¯¤p B *+é>8 ' ß^¢ ¢ïð M Ôþ= M ' ¢§ ' ß^¢(m ¢ïð Lùþ= ' ºoM þ= º^*+RÂ㢧 ' ¸nà ª¢Áó.M ' ¢ÌoM@þe¯t¢(m8 ' ¢ïð¢Ë § ' 5¢¨ 5' 9È?I?LQRTýº^*+, ( !