本节学习重点 ·DNA变性曲线，包括增色效应、减色效应 、Tm及其影响因素 ·DNA复性曲线，包括影响复性的诸多因素 和Cot2
本节学习重点 • DNA变性曲线，包括增色效应、减色效应 、 Tm及其影响因素 • DNA复性曲线，包括影响复性的诸多因素 和 C0 t(1/2)
一、DNA分子的变性 1、变性（denaturation或融解melting): DNA双螺旋区的氢键断裂，使双螺旋的两条链完全分开 变成单链，这一链分离的过程叫做变性。 变性只涉及氢键的断裂 磷酸二酯键断裂核酸降解 条件：加热，高pH,有机溶剂（尿素、酰胺），低盐浓度等 2、DNA热变性 当将DNA的稀盐溶液加热到80-100℃时，双螺旋的结 构即发生解体，两条链分开，形成无规则线团
一、DNA分子的变性 1、变性（denaturation 或 融解 melting）： DNA双螺旋区的氢键断裂，使双螺旋的两条链完全分开 变成单链，这一链分离的过程叫做变性。 条件：加热，高pH，有机溶剂（尿素、 酰胺 )，低盐浓度等 2、DNA热变性 当将DNA的稀盐溶液加热到80-100℃时，双螺旋的结 构即发生解体，两条链分开，形成无规则线团。 变性只涉及氢键的断裂 磷酸二酯键断裂-核酸降解
3.DNA热变性过程的表现 ·是一个爆发式的协同过程，变性作用发生在一个很 窄的温度范围 ·导致一些理化性质发生剧烈变化 ※熔液黏度降低 ※沉降速度加大 ※浮力密度上升 ※此外吸收值升高（A260nm),即增色效应 指在DNA变性的过程中，它在260nm的吸收值先是缓慢 上升，达到某一温度时骤然上升
※ 熔液黏度降低 ※ 沉降速度加大 ※ 浮力密度上升 ※ 此外吸收值升高（A260nm），即增色效应 指在DNA变性的过程中，它在260nm的吸收值先是缓慢 上升，达到某一温度时骤然上升。 3. DNA热变性过程的表现 • 是一个爆发式的协同过程，变性作用发生在一个很 窄的温度范围 • 导致一些理化性质发生剧烈变化
单一核苷酸的光吸收值最大，其次是单链DNA或RNA,双 链DNA最小，这是由于碱基在疏水环境中的堆积作用所造成 的。即双链DNA相对于单链DNA是减色的(hypochromic), 反之单链DNA相对于双链DNA是增色的(hyperchromic)
单一核苷酸的光吸收值最大，其次是单链DNA或RNA，双 链DNA最小，这是由于碱基在疏水环境中的堆积作用所造成 的。即双链DNA相对于单链DNA是减色的（hypochromic）， 反之单链DNA相对于双链DNA是增色的（hyperchromic）
熔解曲线与Tm值 缓慢而均匀地增加DNA溶 液的温度，可根据各点的 OD A260nm的吸光度值绘制 1.37 成DNA的熔解曲线。 1.185 吸光度值增加到最大值一半时的温 度称为DNA的解链温度(Tm)值 1.0 ℃ Tm=OD增加值的中点温度 或DNA双螺旋结构失去一半时的温度 Tm是DNA的(G+C)含量的函数
1.185 1.0 1.37 OD ℃ Tm = OD增加值的中点温度 或DNA双螺旋结构失去一半时的温度 Tm是DNA的（G+C）含量的函数。 熔解曲线与Tm值 缓慢而均匀地增加DNA溶 液的温度，可根据各点的 A260nm的吸光度值绘制 成DNA的熔解曲线。 吸光度值增加到最大值一半时的温 度称为DNA的解链温度（Tm）值