(3)粘性末端的意义 ①连接便利 不同的DNA双链: 只要粘性末端碱基互补就可以连接。 这比连接两个平齐末端容易的多。 i)同一个DNA分子内连接: 通过两个相同的粘性末端可以连接成环 形分子
① 连接便利 （3）粘性末端的意义 i）不同的DNA双链： 只要粘性末端碱基互补就可以连接。 ii）同一个DNA分子内连接： 通过两个相同的粘性末端可以连接成环 形分子。 这比连接两个平齐末端容易的多
G-A-A-T-T-C G-A-A-TTCTTT C-T-T-A-A-G LCT.TA-A-⊥ Cleavage with EcoRI Cleavage with EcoRI G A·A·T-T-C Fragments with C-T-T-A-A complementary tails p Annealing allows recombinant GA-A-T-T-C DNA molecules to form by complementary base pairing. ⊥c1--A-AC The two strands are not covalently bonded as indicated by shaded gaps DNA ligase G-A-A-T-T-C T DNA ligase seals the gaps covalently bonding the C-T-T-A-A-G two strands
②5末端标记 凸出的5末端可用DNA多核苷酸激酶进行32P 标记。 凸出的3端可以通过末端转移酶添加几个多聚 核苷酸的尾巴(如AAA或TTT等)造成人工粘 性末端。 ③补平成平齐末端 粘性末端可以用DNA聚合酶补平成平齐末端
③ 补平成平齐末端 凸出的3’端可以通过末端转移酶添加几个多聚 核苷酸的尾巴（如AAA或TTT等）造成人工粘 性末端。 ② 5’末端标记 凸出的5’末端可用DNA多核苷酸激酶进行32P 标记。 粘性末端可以用DNA聚合酶补平成平齐末端
Pwu等产生的平头末端 5G-C-T-C-A-G-C-E-G-G-A-G 3. C-GAG-T-C-G-A-C-C-T-C 5 Pvu‖37℃c 5‘…GCTC-A-G-0H P-C--G-G-A-G C-G-A-G--C OH-G-A-CCTC∴.53
Pvu II等产生的平头末端 5‘ … G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C … 5’ Pvu II 37 ℃ 5‘ … G-C-T-C-A-G-OH P-C-T-G-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-G-T-C-P OH-G-A-C-C-T-C … 5’
(4)同裂酶( isoschizomers) 识别位点的序列相同的限制性内切酶。 ①完全同裂酶 识别位点和切点完全相同。 如HindⅢ和HSul。 HidⅢ5- AVAGCTT-3 3- TTCGA个A-5 Hsu 5 AVAGCTT-3 3- TTCGA个A-5
识别位点的序列相同的限制性内切酶。 （4）同裂酶 (Isoschizomers) ① 完全同裂酶： 识别位点和切点完全相同。 如Hind Ⅲ 和Hsu I。 Hind Ⅲ 5’-AAGCTT-3’ 3’-TTCGAA-5’ Hsu I 5’-AAGCTT-3’ 3’-TTCGAA-5’