湖南中医药大学：《生物工程概论》课程电子教案（PPT教学课件）第三讲 基因工程的酶学基础

②不完全同裂酶: 识别位点相同,但切点不同。 如Xma|和Smal XmaI 5'-CVCCGGG-3 3- GGGCC个C-5 Smal 5 -CCC\GGG-32 3-GGG个CCC-5

Xma I 5’-CCCGGG -3’ 3’-GGGCCC-5’ Sma I 5’-CCCGGG-3’ 3’-GGGCCC-5’ 识别位点相同，但切点不同。 如Xma I 和 Sma I。 ② 不完全同裂酶：

(5)同尾酶( socaudamers) 识别的序列不同,但能切出相同的粘性末端。如 BamH|、Bg|Ⅱ、Bcl、XhoⅡ等 BamH I5-GVGATCC-3' 3 CCTAG个G-5 Bg江5 AVGATCT-3 3- TCTAG个A-5 Bcl l 5 -TVGATCA-32 3- ACTAG个T5 Xho∏ 5-√ GATCY-3 3YTAG个U-5 U代表嘌呤;Y代表嘧啶

识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。如 BamH I、Bgl Ⅱ、Bcl I、Xho Ⅱ等 （5）同尾酶 (Isocaudamers） 5’-GGATCC-3’ 3’-CCTAGG-5’ BamH I Bcl I 5’-TGATCA-3’ 3’-ACTAGT-5’ 5’-AGATCT-3’ 3’-TCTAGA-5’ Bgl Ⅱ 5’-UGATCY-3’ 3’-YCTAGU-5’ Xho Ⅱ U代表嘌呤；Y代表嘧啶

Sau 3A 5-, 3-TAG个5 同尾酶的粘性末端互相结合后形成的新位点 一般不能再被原来的酶识别。 GATCT-3 BamH 5’-G 3-CCTAG A5BgⅡ 5’- GGATCT3 BamH丨 3-CCTAGA-5 Bq亚 Sau 3

5’-GATC----3’ 3’----CTAG-5’ Sau 3A 同尾酶的粘性末端互相结合后形成的新位点 一般不能再被原来的酶识别。 ？ 5’-G 3’-CCTAG GATCT-3’ BamH I A-5’ Bgl Ⅱ 5’-GGATCT-3’ 3’-CCTAGA-5’ BamH I Bgl Ⅱ Sau 3A

(6)限制酶的酶活性 限制性内切酶的识别和酶切活性一般在一定的 温度、离子强度、pH等条件下才表现最佳切割 能力和位点的专一性。 所以一般使用专一的反应缓冲液。 ①星号(*)活性 如果改变反应条件就会影响酶的专一性和切割 效率,称为星号(*)活性

限制性内切酶的识别和酶切活性一般在一定的 温度、离子强度、pH等条件下才表现最佳切割 能力和位点的专一性。 （6）限制酶的酶活性 如果改变反应条件就会影响酶的专一性和切割 效率，称为星号（*）活性。 所以一般使用专一的反应缓冲液。 ① 星号（*）活性

使用的时候要特别注意! EcoR|和BamH等都有*活性。 EcoR I: GAATTC 在低盐、高pH(>8)时可识别和切割 GAATTA、 AAATTC、 GAGTTC等

EcoR I和BamH I等都有*活性。 在低盐、高pH（>8）时可识别和切割 GAATTA、AAATTC、GAGTTC等 EcoR I： GAATTC 使用的时候要特别注意！