湖南中医药大学：《生物工程概论》课程电子教案（PPT教学课件）第三讲 基因工程的酶学基础

(2)切割位点 识别位点处 切开双链DNA。形成粘性末端( sticky end)或 平齐末端( blunt end)。如 ECOR I 5-G\AATTC-3'ECORV 5-GATVATC-3' 3-CJAA个G-5 3CTA个TAG-5 PstI 5 -CTGCAvG-32 3-G个 ACGTO-5 产生平齐末端 产生粘性末端 GATATC OLV LVD

EcoR I 5’-GAATTC-3’ 3’-CTTAAG-5’ Pst I 5’-CTGCAG-3’ 3’-GACGTC-5’ 产生粘性末端 EcoR V 5’-GATATC-3’ 3’-CTATAG-5’ 产生平齐末端 （2）切割位点 切开双链DNA。形成粘性末端（sticky end）或 平齐末端（blunt end）。如： 识别位点处

(3)粘性末端( sticky ends, cohensⅳ e ends) 含有几个核苷酸单链的末端。 分两种类型: GAATTC OLLVV5- ①5端凸出(如EcoR切点) 5 G√ AATTC 3 3 ICTTAA个G 5 5’- G AATTC 3 CTTAA G 5

（3）粘性末端（sticky ends，cohensive ends） 含有几个核苷酸单链的末端。 分两种类型： ① 5’端凸出（如EcoR I切点） GAATTC CTTAA G G AATTC CTTAAG 5’- -3’ 3’- -5’ 5’- -3’ 3’- -5’

EcoR等产生的5“粘性末 端 5 G-C-T-G-A-A--T-C-G-A-G 3..C-GAC-TTA-A-G-C-T-C 5 EcoR1 37C 5 G-C-T-G-OH P-A-A-T-T-C-G-A-G 3….cGAC-T-TA=A=P OH-G-CTC∴.5 退火4-7℃ OH P 5∴ G-C-T-GA-A-CGAG 3.C-GAC-T-T-A-AG-C-T-C.5 P OH

EcoR I等产生的5‘粘性末 端 5‘ … G-C-T-G-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-G-C-T-C … 5’ EcoR I 37 ℃ 5‘ … G-C-T-G-OH P-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-P OH-G-C-T-C … 5’ 退火 4-7 ℃ 5‘ … G-C-T-G A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-C-T-T-A-AG-C-T-C … 5’ OH P P OH

②3端凸出(如Pst切点) 5 ICTGCAVG -3 3 G个 ACGTC -5 5 ICTGCA 3- ACGTC 5

CTGCAG ② 3’端凸出（如Pst I切点） GACGTC 5’- -3’ 3’- -5’ 5’- -3’ 3’- -5’ CTGCA G G ACGTC

尸st等产生的3“粘性末 端 5 G-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G C-G-A-G-A-C-GP-C-C-T-C 5 Pst|37℃ 5‘∴GCTC-TG-C-A-0H P-G-G-A-G 3….cGA-G OH-A-C-G-T-C-C-T-C 5 退火4-7℃ OH P 5"∴ GC-T-C-T-G-O- AG-G-A-G 3.C-GA-GA-C-G-T-C-C-T-C 5

Pst I等产生的3‘粘性末 端 5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’ Pst I 37 ℃ 5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A-OH P-G-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-G-P OH-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’ 退火 4-7 ℃ 5‘ … G-C-T-C-T-G-C-AG-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-G A-C-G-T-C-C-T-C … 5’ OH P P OH