Phage Pour mixture 校变清亮 onto agar plate 平板 Nutrient agar plate 迹平板 若是噬菌体标本经过适当稀释再接种细菌平 板，经过一定时间培养，在细菌菌苔上可形成圆 形局部透明区城，即噬斑(plague)。 如同对知菌计数一样，形成的噬菌斑也可用于 对噬菌体的数目进行估算
四、病毒的培养和纯化 1、病毒的培养 噬菌体 细菌培养物 培养液 营养琼脂平板 细菌培养液变清亮 细菌平板成为残迹平板 若是噬菌体标本经过适当稀释再接种细菌平 板,经过一定时间培养,在细菌菌苔上可形成圆 形局部透明区域，即噬斑（plague）。 如同对细菌计数一样，形成的噬菌斑也可用于 对噬菌体的数目进行估算
四、病毒的培养和纯化 Amnion inoculation Embryo inoculation Air sac membrane inoculation Amniotic cavity Chorioallantoic membrane Shell Yolk sac inoculation cavity Yolk sac Albumin. b Figure 6.21 (a)A technician inoculates fertilized chicken eggs with viruses in Figure 6.22 the first stage of preparing vaccines.This process requires the Pocks(white patches)developing on a chorioallantoic membrane highest levels of sterile and aseptic precautions.(b)Cultivating removed from a chicken embryo.Several viral groups,including animal viruses in a developing bird embryo.The shell is perforated poxviruses and herpesviruses (shown here).cause pocks. using sterile techniques,and a virus preparation is injected into a site selected to grow the viruses.Targets include the allantoic cavity,a fluid-filled sac that functions in embryonic waste removal: he amniotic cavity.a sac that cushions and protects the embryo itself:the chorioallantoic membrane,which functions in embryonic gas exchange:the yolk sac,a membrane that mobilizes
1、病毒的培养 动物病毒 实验动物 鸡胚 多种细胞培养
四、病毒的培养和纯化 大多数动物病毒感染敏感细胞培养能 引起其显微表现的改变，即产生致细胞病 变效应(cytopathic effect,CPE),例如细胞 聚集成团、肿大、圆缩、脱落，细胞融合 形成多核细胞，细胞内出现包涵体 (inclusion body),乃至细胞裂解等。 若标本经适当稀释进行接种并辅以染色 处理，病毒可在培养的细胞单层上形成肉 眼可见的局部病损区城，即蚀斑(plaque) 或称空斑. sue is treated
四、病毒的培养和纯化 1、病毒的培养 若标本经适当稀释进行接种并辅以染色 处理,病毒可在培养的细胞单层上形成肉 眼可见的局部病损区域,即蚀斑(plaque) 或称空斑. 大多数动物病毒感染敏感细胞培养能 引起其显微表现的改变,即产生致细胞病 变效应(cytopathic effect,CPE),例如细胞 聚集成团、肿大、圆缩、脱落,细胞融合 形成多核细胞,细胞内出现包涵体 (inclusion body),乃至细胞裂解等
四、病毒的培养和纯化 1、病毒 (参见P161) 植物病 斑，或称枯斑
1、病毒的培养 （参见P161） 植物病毒 敏感植物叶片 产生坏死斑，或称枯斑
四、病毒的培养和纯化 2、病毒纯化 生物体 标 100,000×g Decant; 1-3 hours resuspend 应保持其感染性 子的属性 8.000-10.000×g 质应具有均一性 10-20min 质蛋白质提纯方 100,000×g O Decant 1-3 hours supernate 元淀，有机溶剂沉淀， 子交换等 状和密度 Figure 16.6 The Use of Differential Centrifugation to Purify a 心（超速离心 Virus.At the beginning the centrifuge tube contains homogenate and
蛋白质提纯方法 盐析,等电点沉淀,有机溶剂沉淀, 凝胶层析,离子交换等 2、 病毒纯化 标准 纯化的病毒制备物应保持其感染性 病毒是有感染性的生物体 病毒具有化学大分子的属性 方法 主要化学组成为蛋白质 具有一定的大小、形状和密度 差速离心 梯度离心(超速离心)