(一)双脱氧链末端终止法测序原理 140 A A C T G A G TT ccc A r c A T GTACTTGT 图18-7双脱氧链末端终止法测序反应原理(5)
◈ ⊃ ► ◄ ■ （一）双脱氧链末端终止法测序原理 图18-7 双脱氧链末端终止法测序反应原理（5）
(二)新生链的荧光标记原理 早期采用同位素法标记新生链，因其具有放射性危害、背 景高等缺点而很快被荧光染料标记法所取代 荧光染料的荧光和散射背景较弱，提高了信噪比；它们的 激发光谱较接近而发射光谱均位于可见光范围，且不同染 料的发射光谱相互分开，易于监测，故在DA自动测序 中得到广泛应用 ◇》
◈ ⊃ ► ◄ ■ （二）新生链的荧光标记原理 ❖ 早期采用同位素法标记新生链，因其具有放射性危害、背 景高等缺点而很快被荧光染料标记法所取代 ❖ 荧光染料的荧光和散射背景较弱，提高了信噪比；它们的 激发光谱较接近而发射光谱均位于可见光范围，且不同染 料的发射光谱相互分开，易于监测，故在DNA自动测序 中得到广泛应用
(二)新生链的荧光标记原理 荧光标记引物法 ·荧光染料 「单色荧光标记法 荧光标记终止底物法 标记法 多色荧光标记法 荧光标记引物法 荧光标记终止底物法
◈ ⊃ ► ◄ ■ （二）新生链的荧光标记原理 • 荧光染料 标记法 单色荧光标记法 多色荧光标记法 荧光标记引物法 荧光标记终止底物法 荧光标记引物法 荧光标记终止底物法
(二)新生链的荧光标记原理 多色荧光标记法·荧光标记引物法 定义：将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的5端 冬一组(4种)荧光标记引物，其序列相同，但标记的荧光 染料颜色不同 测序反应中，模板、反应底物、DNA聚合酶及标记引物 等按A、T、C、G编号被置于4支微量离心管中，A、T、 C、G四个测序反应分管进行，上样时合并在一个泳道内 电泳。特定颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核苷酸 底物保持对应关系 ◇》
◈ ⊃ ► ◄ ■ （二）新生链的荧光标记原理 多色荧光标记法 - 荧光标记引物法 ❖ 定义：将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的5’端 ❖ 一组（4种）荧光标记引物，其序列相同，但标记的荧光 染料颜色不同 ❖ 测序反应中，模板、反应底物、DNA聚合酶及标记引物 等按A、T、C、G编号被置于4支微量离心管中，A、T、 C、G四个测序反应分管进行，上样时合并在一个泳道内 电泳。特定颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核苷酸 底物保持对应关系 5
(二)新生链的荧光标记原理 ·荧光标记引物法 Primer Primer Primer Primer 图18-8荧光标记弜引物法原理
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