一、全自动DNA测序仪工作原理 Sanger双脱氧链末端终止法 Maxam-Gilber化学降解法 都是根据在某一固定的点开始核苷酸链的延伸，随机在某 一个特定的碱基处终止，产生A、T、C、G四组不同长度 的一系列核苷酸链，在变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳进行片 段的分离和检测，从而获得DNA序列 双脱氧链末端终止法更简便和更适合于光学自动探测，故 在全自动DNA测序仪中应用广泛
◈ ⊃ ► ◄ ■ 一、全自动DNA测序仪工作原理 Sanger双脱氧链末端终止法 Maxam-Gilber化学降解法 ❖ 都是根据在某一固定的点开始核苷酸链的延伸，随机在某 一个特定的碱基处终止，产生A、T、C、G四组不同长度 的一系列核苷酸链，在变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳进行片 段的分离和检测，从而获得DNA序列 ❖ 双脱氧链末端终止法更简便和更适合于光学自动探测，故 在全自动DNA测序仪中应用广泛
(一)双脱氧链末端终止法测序原理 利用DNA的体外合成过程一一聚合酶链反应 (polymerase chain reaction,PCR) DNA聚合酶的催化 以目的DNA为模板 单核苷酸聚合形成新DNA链 按照碱基互补配对原则 冬在引物的引导下
◈ ⊃ ► ◄ ■ （一）双脱氧链末端终止法测序原理 ❖ 利用DNA的体外合成过程－－聚合酶链反应 （polymerase chain reaction, PCR） ❖ DNA聚合酶的催化 ❖ 以目的DNA为模板 ❖ 按照碱基互补配对原则 ❖ 在引物的引导下 单核苷酸聚合形成新DNA链
(一)双脱氧链末端终止法测序原理 ·普通的PCR反应体系中，加入 的核苷酸单体为4种2'-脱氧核苷 Base 三磷酸（dATP,dCTP,dGTP, dTTP) N Base Base HO 图18-1dNTP结构示意图
◈ ⊃ ► ◄ ■ （一）双脱氧链末端终止法测序原理 • 普通的PCR反应体系中，加入 的核苷酸单体为 4种2’-脱氧核苷 三磷酸（dATP，dCTP，dGTP， dTTP） 图18-1 dNTP结构示意图
(一)双脱氧链末端终止法测序原理 。 测序反应体系中，加入的核苷酸 单体为2,3'-双脱氧核苷三磷酸 (ddNTP) NH Base 0p8 Base 图18-2 ddNTP结构示意图
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(一)双脱氧链末端终止法测序原理 与dNTP相比，ddNTP在脱氧核糖的位置上缺少一 个羟基，反应过程中虽然可以在DNA聚合酶作用下， 通过其磷酸基团与正在延伸的DNA链的末端脱氧核糖 -OH发生反应，形成磷酸二酯键而掺入到DNA链中， 但它们本身没有-OH,不能同后续的dNTP形成磷酸 二酯键，从而使正在延伸的DNA链在此终止
◈ ⊃ ► ◄ ■ （一）双脱氧链末端终止法测序原理 与dNTP相比，ddNTP在脱氧核糖的位置上缺少一 个羟基，反应过程中虽然可以在DNA聚合酶作用下， 通过其磷酸基团与正在延伸的DNA链的末端脱氧核糖 -OH发生反应，形成磷酸二酯键而掺入到DNA链中， 但它们本身没有-OH，不能同后续的dNTP形成磷酸 二酯键，从而使正在延伸的DNA链在此终止