入噬菌体感染大肠杆菌的途径 λ噬菌体 A DNA ADNA 溶解途径 进入细胞 入噬菌体 活性 E.coli 容源途径 DNA 细菌细胞 DNA整合到E.coli基因组 勾
噬菌体感染大肠杆菌的途径
DNA重组体的筛选 ·载体特征的直接筛选 。菌落的原位杂交 。免疫学方法 ☒
DNA重组体的筛选 • 载体特征的直接筛选 • 菌落的原位杂交 • 免疫学方法
如果外源DNA 如果外源DNA 插入，氨卞青霉 EcoRI 素扰性基因失活 BamHI 插入，四环素扰性 基因失活 PstI Sall 氨苄青霉素 四环素 抗性基因 抗性基因 (ampR) (tetR) 复制起点 (ori) PvulI pBR322质粒结构 可
pBR322质粒结构 如果外源DNA 插入，氨卞青霉 素抗性基因失活 如果外源DNA 插入，四环素抗性 基因失活
复印至硝酸 纤维素膜上 用NaOH菌体裂 细菌菌落 解DNA变性 0 单链DNA结 合到膜上 32P-cDNA 杂交 放射自显影 原位杂交法筛选 DNA重组体图解 与放射性cDNA杂 交的菌落的斑点
原位杂交法筛选 DNA重组体图解 复印至硝酸 纤维素膜上 用NaOH菌体裂 解DNA变性 杂交 放射自显影 32P-cDNA 与放射性cDNA杂 交的菌落的斑点 细菌菌落 单链DNA结 合到膜上
限制性酶切割 限制片段 Southern 印迹法 DNA分子 琼脂糖电泳 1111/11/ 11∥1// 带有DNA片 1111111/ 段的凝胶 /1/m111 用缓冲液 转移至硝酸纤维素膜上 转移 DNA 凝胶 滤膜 与放射性标记 DNA探针杂交 U1I1111 吸附有DNA 片段的膜 放射自显影 //l∥/I/
Southern 印迹法 DNA分子 限制性酶切割 限制片段 琼脂糖电泳 转移至硝酸纤维素膜上 与放射性标记 DNA探针杂交 放射自显影 带有DNA片 段的凝胶 凝胶 滤膜 用缓冲液 转移 DNA 吸附有DNA 片段的膜