原理 基于2'、3'ddNTP在脱氧核糖的3'位置缺少羟基，当 DNA聚合酶通过其5'三磷酸基团掺入到正在增长的DNA 链后，因其缺乏3羟基，后继的dTP不能与之形成磷酸 二酯键，从而使DNA链终止延伸。于是，在DNA合成反 应混合物的4种dNTP中加入少量的一种ddNTP,当DNA 合成过程中，随机掺入到正在增长的DNA链上的ddNTP 将终止链的进一步延伸，这样，以同一DNA为模版所合成 的拷贝链，将是一系列不同长度的核苷酸链，其长度取决 于引物末端到过早出现链终止位置之间的距离。在四组独 立的反应体系中，分别加入4种不同的ddNTP和一种经标 记的dNTP,结果将产生4组长度不均的寡核苷酸，分别终 止于模板链的每一个A、C、G或T的位置上。然后采用能 分辩长度仅差一个核苷酸的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，把 四组反应液加样于凝胶中若干相邻的泳道上，电泳并放射 自显影后，从凝胶的放射自显影片上可直接读出DNA上的 核苷酸序列
单香框板NA 有首板引约 4林NT黄包a-SHATP :DNA￥合阳 cdTTp ddcTP ddGTP ddAT Dw nn 引椅 DW rAnM 折行成的DNA 每NTP取代正岩的NT以德人，新合横的DNA每马士上缕止 动束增线的从脱氧稿百酸 使议性标记山小入变生样通过电过进行分等 三
实验步骤 1.双链DNA测序反应 1) DNA 12ul(3-5ug) 水 6 ul 2M NaOH/1 mM EDTA 2 ul 37℃10min 2)水 7ul 3M NaAC 6ul 100%乙醇 75 ul 插入干冰5min 3)离心10min(4℃)，吸弃乙醇，移入70%预冷乙醇 110ul,离心10min(4℃)，吸弃乙醇，真空离心干燥5min
4) H20 6 ul 引物 2 ul Sequence Buffer 2 ul 65℃2min,在室温下10-30min内逐渐降至室温。 5)其间，标记4管： G A TC,加入： Dideoxy Termination Mix ddG ddA ddT ddC 2.5 2.5 2.52.5 (ul) 放于一侧。于前管加入： 6)0.1MDTT 1ul 稀释的Labeling Mix（1:4H2O) 2 ul a[3S]dATP 1 ul 稀释的Sequenase 2 ul 混匀（避免气泡），室温下放置5min
7)分别将此液加入 G A TC管中： 3.5 3.53.5 3.5(ul) 37℃水浴10min。分别加入： Stop Solution 4 444(ul) 75-80℃水浴3min,置于冰上。 放入4℃冰箱，待次日电泳