实验27 阳性单菌落扩增与 小量DNA制备
目的 1.为进一步鉴定重组质粒提供适量的质粒DNA 排除自身环化。鉴定方法主要有： (1)PCR法。采用载体两端的引物进行PCR,一旦插入 成功，则可以在电泳的凝胶中见到与插入片段分子量大小 致的PCR产物。 (2)Southern blot法。将培养皿上的菌落转移到硝酸 纤维素膜上，变性、固定，以插入片段为探针作Southern bIot。重组成功者，在相应的菌落位置上可以见到放射自 显影的黑点，培养皿上对应的菌落即为重组成功者。 (3)酶切鉴定法
2.提供一定数量的DNA以满足一些实验 比如： (1)测序； (2)准备杂交用的探针。 这是该实验的两个主要目的
原理 挑选单一菌落，培养扩增。离心收集扩增了的大肠杆 菌，用碱性液裂解细菌，再经酸性溶液处理形成钾-SDS 蛋白质-膜复合物，离心后，此复合物与细菌染色体DNA、 高分子量的RNA等得到沉淀，而细菌中小分子量的质粒 DNA将溶于上清之中。上清经乙醇沉淀后，得到质粒DNA
实验准备 (参考教材)