实验25 重组质粒
目的 1.放大某一基因片段，用于探针、基因功能检测、报 道基因研究等。方法是：把某一DNA片段插入到相应的载 体（比如质粒、噬菌体、哺乳类细胞表达载体等），给予扩 增，用以标记探针、测序、cDNA库建立、基因功能检测等 多种分子生物学实验。因此重组质粒就成为中医药实验研 究中最为常规的实验。 通常，扩增目的DNA主要借助两类方法，即PCR技术 和载体重组技术，鉴于PC技术受到酶的性能和方法学等 多方面的限制，某些DNA和超过一定长度DNA的扩增会有 困难，所以载体重组技术倍受青睐
2.DDPCR产物的克隆和测序。 3.RACE PCR产物的克隆和测序。 4.构建基因库、cDNA库，等。 5.纯化基因片段 关于载体一 质粒 质粒是一类双链、闭环的DNA分子，存在于细菌体 中，独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗 传单位。通过改造，实验室常用质粒被赋予了以下几种 特性：
1.含有多克隆位点区域，可方便地插入目的DNA片 段。 2.对细菌的可转移性，即在实验中，可将质粒诱导 入细菌。 3.选择标记。常用的有抗生素抗性基因。这样，一 旦质粒进入细菌，便可使该细菌对相应的抗生素产生抵 抗能力，在含这一抗生素的琼脂平板上传代。 4.在细菌体内可获得较高的拷贝数，例如一种叫pUC 的质粒，在单一细菌体中的拷贝数可达500-700个。因 此，质粒已成为分子生物学中使用最为广泛的载体。 本实验所用的质粒是pUC19,全长2686个碱基对 (bp),在质粒的10-110bp段为多克隆位点区域，含有 PstI、EcoR I、KpnI、SmaI、Hind I11、BamH I、Sac !等多种限制性内切酶的位点
EC001092674PHo46 BstAPI 179 Aatll 2617 Ndel 183 Sspl 2501 Ehel 235 Pdml 2294 Bcgl 2215 2486 146/ 236 MCS Scal 2177 lacZ 469. pUC18/19 BsaXI 659 Sapl 683 2686bp 852. Aflll,Pscl 806 Gsul 1784 1626 Cfr10l1779 1466 Ec03111766 Eam11051694, ep (pMB1) BseYl 1110 Cail 1217