限制性内切酶 原核生物中存在着一类能识别外源DNA双螺旋中4-8个碱基 对所组成的特异的具有二重旋转对称性的回文序列,并在此序 列的某位点水解DNA双螺旋链,产生粘性末端或平末端,这类 酶称为限制性内切酶( ristriction endonuclease)。 ●类型 ●命名 ●义
限制性内切酶 • 类型 • 命名 • 意义 原核生物中存在着一类能识别外源DNA双螺旋中4-8个碱基 对所组成的特异的具有二重旋转对称性的回文序列,并在此序 列的某位点水解DNA双螺旋链,产生粘性末端或平末端,这类 酶称为限制性内切酶(ristriction endonuclease)
常用的DNA限制性内切酶的专一性 酶 辨认的序列和切口 说明 ·AGCT。 Alu i .TCGA· 四核苷酸,平端切口 Bam hi · GGATCO 六核苷酸,粘端切口 CCTAGG Bgl I … AGATCT… 六核苷酸,粘端切口 TCTAGA ECoR I GAATTO·· 六核苷酸,粘端切口 CTTAAG HindⅢ AAGCTT。 六核苷酸,粘端切口 TTCGAA∴∴ Sal I …… GTCGAC∴∴ 六核苷酸,粘端切口 CAGCTG… Sma i … CCCGGG… 六核苷酸,平端切口 .GGGCCC
常用的DNA限制性内切酶的专一性 酶 辨认的序列和切口 说明 ‥ ‥A G C T ‥‥ ‥ ‥T C G A ‥ ‥ ‥ ‥G G A T C C ‥‥ ‥ ‥C C T A G G ‥‥ ‥ ‥A G A T C T ‥‥ ‥ ‥T C T A G A ‥‥ ‥ ‥G A A T T C ‥‥ ‥ ‥C T T A A G ‥‥ ‥ ‥A A G C T T‥‥ ‥ ‥T T C G A A ‥‥ ‥ ‥G T C G A C ‥‥ ‥ ‥C A G C T G ‥‥ ‥ ‥C C C G G G ‥‥ ‥ ‥G G G C C C ‥‥ Bam H I Alu I Bgl I Eco R I Hind Ⅲ Sal I Sma I 四核苷酸,平端切口 六核苷酸,平端切口 六核苷酸,粘端切口 六核苷酸,粘端切口 六核苷酸,粘端切口 六核苷酸,粘端切口 六核苷酸,粘端切口
限制性內物酶类型 I型:分子量大于105,多亚基,镥S线苷蛋氨酸、ATP 和M 识别点与切割仇点相差甚远,产物为异质,是限 制与修饰相排斥的多功能酶 Ⅱ烈:分子量小于105,卿Mg2,切割位点位于识别 位京上,产物为专一性片段,不具修饰酶功能。现在分子生 物学研究所用的限制性内切酶均为此类, ⅡI型:识别笕点为57bp的非对称序列,切割位点在 顺序之外离识别序列5-10bp,切割双链,个别也切割单链。 是限制与修饰相多功能酶
限制性内切酶类型 I型:分子量大于105,多亚基,需S-线苷蛋氨酸、ATP 和Mg2+ ,识别位点与切割位点相差甚远,产物为异质,是限 制与修饰相排斥的多功能酶. Ⅱ型:分子量小于105,需Mg2+ ,切割位点位于识别 位点上,产物为专一性片段,不具修饰酶功能。现在分子生 物学研究所用的限制性内切酶均为此类。 ⅡI型:识别位点为5-7bp的非对称序列,切割位点在 顺序之外离识别序列5-10bp,切割双链,个别也切割单链。 是限制与修饰相多功能酶
限制性内切酶的命名和意义 例: ECorI,这是从大肠杆菌(Ecoi)R菌珠中分离出的一种限制性内切酶 ECoRI 属名种名株名序号 限制性内切酶是分析染色体结构、制作DNA限 制图谱、进行DNA序列测定和基因分离、基因体外 重组等研究中不可缺少的工具,是一把天赐的神刀, 用来解剖纤细的DNA分子
限制性内切酶的命名和意义 Eco R I 属名 种名 株名 序号 例:Eco R I,这是从大肠杆菌(Ecoli)R菌珠中分离出的一种限制性内切酶 限制性内切酶是分析染色体结构、制作DNA限 制图谱、进行DNA序列测定和基因分离、基因体外 重组等研究中不可缺少的工具,是一把天赐的神刀, 用来解剖纤细的DNA分子
核苷酸的降解(自学) 核苷酸酶核苷酸磷酸化酶 核苷酸 核苷 碱基+(脱氧)戊糖 磷酸 l、嘌呤的降解 2、嘧啶的降解
核苷酸的降解(自学) 2、嘧啶的降解 1、嘌呤的降解 核苷酸酶 核苷酸磷酸化酶 核苷酸 核苷 碱基+(脱氧)戊糖 磷酸