实验四人外周血淋巴细胞分离计数、活力测定密度梯度离心法采用淋巴细胞分离液离心人外周血，根据外周血各细胞体积、形态及比重不同，将离心后呈密度梯度分布的单个核细胞分离出来
实验四 人外周血淋巴细胞分离、 计数、活力测定 采用淋巴细胞分离液离心人外周血， 根据外周血各细胞体积、形态及比重 不同，将离心后呈密度梯度分布的 单个核细胞分离出来。 密度梯度离心法
外周血白细胞分类
外周血白细胞分类
【实验原理】人外周血RBC、粒细胞比重为：1.092单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞，比重为1.075因此选用比重介于二者之间而近于等渗的淋巴细胞分离液（比重为1.077±0.001）进行密度梯度离心，离心后不同比重的血细胞在分离液中呈梯度分布，从而分离出单个核细胞（淋巴细胞）淋巴细胞分离液组成聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-hypaque)
人外周血RBC、粒细胞比重为：1.092 单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞，比重为 1.075 因此选用比重介于二者之间而近于等渗的淋巴细 胞分离液（比重为1.077±0.001）进行密度梯度 离心，离心后不同比重的血细胞在分离液中呈梯 度分布，从而分离出单个核细胞（淋巴细胞） 【实验原理】 淋巴细胞分离液组成： 聚蔗糖-泛影葡胺 （Ficoll-hypaque）
密度梯度离心示意图
密度梯度离心示意图
【实验材料】1．肝素溶液用生理盐水将肝素配成125~250U/ml的溶液，置4℃下保存备用。2.淋巴细胞分层液市售或自配，20℃时密度应为(1.077±0.001)g/L。3.Hanks液pH 7.2 ~ 7.4。4．完全RPMI-1640培养液5：15ml或50ml锥底离心管6.水平离心机，显微镜7.玻璃吸管，滴管，细胞计数板等。8.2%台盼蓝染液
1．肝素溶液 用生理盐水将肝素配成125～250 U/ml的溶液，置4℃下保存备用。 2．淋巴细胞分层液 市售或自配，20℃时密度应 为(1.077±0.001)g/L。 3．Hanks液 pH 7.2～7.4。 4．完全RPMI-1640培养液。 5．15 ml或50 ml锥底离心管。 6．水平离心机，显微镜。 7．玻璃吸管，滴管，细胞计数板等。 8．2％台盼蓝染液。 【实验材料】