二、包被抗原或抗体A8·+包被(coating):将抗原或抗体结合在固相载体上的过程。直接包被:0.05mol/LpH9.6碳酸盐缓冲液将抗原(抗体)稀释到一定浓度(3~10ug/ml),包被体积100~150ul/well。包被条件37°C2~6小时或4°C过夜。需经预实验筛选最适包被浓度。YYYY
二、包被抗原或抗体 包被(coating):将抗原或抗体结合在固相载体上的过程。 直接包被: 0.05mol/LpH9.6碳酸盐缓冲液将抗原(抗体) 稀释到一定浓度(3~10ug/ml),包被体积100~150ul/well。 包被条件37 ℃2~6小时或4 ℃过夜。 需经预实验筛选最适包被浓度
间接包被构像空间位阻亲和素-生物素化Ag/AbSPA-Ag/Ab
间接包被 构像 空间位阻 亲和素-生物素化Ag/Ab SPA-Ag/Ab
封闭(blocking):A·+由于包被蛋白浓度低造成包被后固相载体表面会剩余少量未结合位点,可非特异性吸附标本中的蛋白质和酶结合物,形成非特异性结合,导致本底增高。为消除千扰,包被后的微孔板或膜用1%~5%牛血清白蛋白(BSA)或5%~20%小牛血清或2%脱脂乳等再包被一次。YYYY消除不完全包被引起的非特异性显色
封闭(blocking): 由于包被蛋白浓度低,造成包被后固相载体表面会剩余 少量未结合位点,可非特异性吸附标本中的蛋白质和酶结 合物,形成非特异性结合,导致本底增高。为消除干扰, 包被后的微孔板或膜用1%~5%牛血清白蛋白(BSA)或 5%~20%小牛血清或2%脱脂乳等再包被一次。 消除不完全包被引起的非特异性显色
三、 酶结合物!?酶结合物(conjugate):通过化学反应使酶与抗原或抗体结合所形成的结合物。酶结合物是酶免疫技术的核心组成,其质量直接影响到酶免疫技术的效果
三、酶结合物 酶结合物(conjugate):通过化学反应使酶与 抗原或抗体结合所形成的结合物。酶结合物是酶免 疫技术的核心组成,其质量直接影响到酶免疫技术 的效果
4+常用的酶辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRPHRP)碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)ALPβ-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-Gal)βGal
β-半乳糖苷酶( β-galactosidase, β-Gal) 辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP) 碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP) HRP ALP β—Gal 常用的酶