72℃第2轮结束
PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 72℃ 第2轮结束
第5轮扩增第4轮扩增模板DNARMSRmERR188aaa第1轮扩增RRRRRR图RR第2轮扩增Ba品MMaaEa00S80nEaaSmRmmRmmmnnnne品RRa88a8a1asaa8saaRRRTaRMn第3轮扩增0aas08a8sm8888888888a8s000888588MM0aa品aAMM..RMMM全国品国M监品#品品a品品aS8888BB8SS8888SRSa8a8BBBS18SSS...........MMBSARMEEEEMMEEEEMMNEEEENMMEEEEMME8OOmmBmM量8品品品Sm
PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 模板DNA 第1轮扩增 第2轮扩增 第3轮扩增 第4轮扩增 第5轮扩增
PCR反应条件PCR过程PCR的基本原理PCR的特点灵敏度高V皮克（pg=10-12）量级扩增到微克（ug=10-6）水平能从100万个细胞中检出一个靶细胞病毒检测的灵敏度可达3个RFU√细菌检测的最小检出率为3个细菌特异性高√引物的特异性。引物延伸时，碱基配对的正确性。TaqDNA聚合酶合成反应的忠实性。靶基因的特异性与保守性。选择扩增特异性和保守性高的靶基因区域，扩增产物的特异性程度就更高
PCR的基本原理 • PCR反应条件 • PCR过程 • PCR的特点 ü 灵敏度高 ü 皮克(pg=10-12)量级扩增到微克(ug=10-6)水平 ü 能从100万个细胞中检出一个靶细胞 ü 病毒检测的灵敏度可达3个RFU ü 细菌检测的最小检出率为3个细菌 ü 特异性高 ü 引物的特异性。 ü 引物延伸时，碱基配对的正确性。 ü Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性。 ü 靶基因的特异性与保守性。选择扩增特异性和保守性高的 靶基因区域，扩增产物的特异性程度就更高
PCR反应条件PCR过程PCR的基本原理PCR的特点简便、快速整个PCR的扩增在一个小小的离心管中完成，过程也只是简单的温度变化，耐高温的TagDNA聚合酶的应用，避免了DNA聚合酶的反复加入。V一次性加好反应液，2～4小时完成扩增对标本的纯度要求低√血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等组织的粗提DNA
PCR的基本原理 • PCR反应条件 • PCR过程 • PCR的特点 ü 简便、快速 ü 整个PCR的扩增在一个小小的离心管中完成，过程也只是 简单的温度变化，耐高温的Taq DNA聚合酶的应用，避免 了DNA聚合酶的反复加入。 ü 一次性加好反应液，2～4 小时完成扩增 ü 对标本的纯度要求低 ü 血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等组织的粗 提DNA
三PCR反应体系基本组份PCR反应五要素酶(rTaq)dNTPsMg2+引物设计引物分离核酸核酸
PCR反应五要素 酶（rTaq） dNTPs Mg2+ 引物 核酸 引物设计 分离核酸 三 PCR反应体系基本组份