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Tag DNA聚合酶(thermus aquaticus100酶活性(%)80604020506070809040100温度(℃)
Taq DNA聚合酶(thermus aquaticus) 酶 活 性 ( % ) 温度(℃) 40 50 60 70 80 90 100 100 80 60 40 20
94℃55℃72℃PCR循环
94℃ 55℃ 72℃ PCR循环
PCR反应条件PCR的基本原理PCR过程PCR的特点标准的PCR反应体系各200umol/L4种dNTP混合物引物各10~100pmol模板DNA0.1~2ug2.5uTaqDNA聚合酶Mg2+1.5mmol/L
PCR的基本原理 • PCR反应条件 • PCR过程 • PCR的特点 标准的PCR反应体系 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10~100pmol 模板DNA 0.1~2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L
PCR反应条件PCR过程PCR的基本原理PCR的特点23高温变性低温退火适温延伸重复1~3步-25~30轮94形成2条单链温目的DNA片段DNA变性度.72扩增100万倍以上(℃)子链延伸DNA加倍55DNA单链与引物复性22DNA双螺旋3245时间(min)
1 2 3 4 5 22 55 72 94 时间(min) 温 度 (℃) PCR的基本原理 • PCR反应条件 • PCR过程 • PCR的特点 适温延伸 3 高温变性 1 低温退火 2 重复1~3步 25~30轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA单链 与引物复性 D N A 变 性 形 成 2 条 单 链 子链延伸 DNA加倍