6大肠杆菌基因工程 B外源基因在大肠杆菌中高效表达的原理 启动子 终止子 核糖体结合位点 ●密码子 质粒拷贝数
B 外源基因在大肠杆菌中高效表达的原理 6 大肠杆菌基因工程 启动子 终止子 核糖体结合位点 密码子 质粒拷贝数
启动子 目的基因 启动子最佳距离的探测 目的基因 A酶切开 E 启动子 Ba31酶解
启动子 启动子最佳距离的探测 目的基因 E E A E E 启动子 A 酶切开 Bal31酶解 目的基因
启动子 启动子的筛选 采用鸟枪法战略,将合适大小的DNA片段 终止密码子 克隆到启动子探针质粒pKO1上 受体细胞染色体DNA上的gaE、ga/7与质 pKo galK 粒上报告基因ga的表达产物联合作用, 可将培养基中的半乳糖酵解成红色素物质 转化ga、ga、gaK的大肠杆菌受体菌株 含有外源启动子活性的重组克隆
启动子 启动子的筛选 Apr ori pKO1 galK 采用鸟枪法战略，将合适大小的DNA片段 终止密码子 克隆到启动子探针质粒pKO1上 受体细胞染色体DNA上的galE、galT与质 粒上报告基因galk的表达产物联合作用， 可将培养基中的半乳糖酵解成红色素物质 转化galE+ 、galT+ 、galK-的大肠杆菌受体菌株 含有外源启动子活性的重组克隆
启动子 启动子的构建 启动子 35区序列 -10区序列 GA C A G ATA CT recA TGAT A traA A GT TGA C A lac TTTA A TATA A T tac GAC A AA T tac =3 Pro =11 Plac
启动子 启动子的构建 -35 区序列 -10 区序列 PlL PrecA Ptrp Plac PtraA Ptac 启动子 T T G A C A G A T A C T T T G A T A T A T A A T T T G A C A T T A A C T T A G A C A T A A T G T T T T A C A T A T A A T T T G A C A T A T A A T Ptac = 3 Ptrp = 11 Plac
启动子 启动子的可控性 基底水平转录 乳糖启动子Pac的可控性: 阻遏蛋白 野生型的Pa与其控制区Oae 偶联在一起,在没有诱导物 O 存在时,整个操纵子处于基乳糖异丙基β-D-硫 代半乳糖苷(IPTG) 诱导 底水平表达;诱导物可以使 启动子Pa介导的转录大幅 《 高效转录 提高
启动子 启动子的可控性 P 乳糖启动子Plac的可控性： O P O 高效转录 阻遏蛋白 诱导 乳糖 异丙基-b-D-硫 代半乳糖苷（IPTG） 野生型的Plac与其控制区Olac 偶联在一起，在没有诱导物 存在时，整个操纵子处于基 基底水平转录 底水平表达；诱导物可以使 启动子Plac介导的转录大幅 提高