4.影响质粒DNA产量的因素 最重要的是: 菌株的遗传背景 质粒自身的拷贝数。 (1)受体菌株 般要使用edA基因发生突变的大肠杆菌菌株。 如DH5a、JM109、义L1-Bue等。 eηdA基因编码核酸内切酶I,在Mg2+的存在 下可将双链DNA消化成7bp的寡核苷酸片断
最重要的是： 4. 影响质粒DNA产量的因素 菌株的遗传背景， 质粒自身的拷贝数。 一般要使用endA基因发生突变的大肠杆菌菌株。 如DH5、JM109、XL1-Blue等。 （1）受体菌株 endA基因编码核酸内切酶Ⅰ，在Mg2+的存在 下可将双链DNA消化成7bp的寡核苷酸片断
(2)质粒拷贝数 这是直接决定DNA产量的重要因素之一。 由质粒本身的性质所决定。 (3)质粒大小 分子量大的质粒,拷贝数
这是直接决定DNA产量的重要因素之一。 （3）质粒大小 分子量大的质粒，拷贝数少。 （2）质粒拷贝数 由质粒本身的性质所决定
若干常用质粒的理论产量 质粒名 分子大小bp拷贝数质粒产量 ug/ml pGEM 2700 300-7001.8-4.1 pUC 2700 500-7002.9-4.1 pBR322 4400 25 0.23 ColE1 4500 15 0.15 pACYC 4000 10 ≈0.09 pSC101 9000 6 ≈0.12
若干常用质粒的理论产量 质粒名 分子大小bp 拷贝数 质粒产量 g/ml pGEM pUC pBR322 ColE1 pACYC pSC101 2700 2700 4400 4500 4000 9000 300-700 500-700 >25 >15 ≈10 ≈6 1.8-4.1 2.9-4.1 >0.23 >0.15 ≈0.09 ≈0.12
、基因组或其他DNA的提取 1.细菌基因组DNA的制备 般过程及原理: (1)细胞裂解 10%SDS和蛋白酶K,37°温育。 不用NaOH
二、基因组或其他DNA的提取 一般过程及原理： 1. 细菌基因组DNA的制备 （1）细胞裂解 10%SDS和蛋白酶K，37 oC温育。 不用NaOH !
(2)DNA纯化 CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)除去多糖,酚 氯仿-异戊醇除去蛋白。 (3)沉淀DNA 0.6倍体积的异丙醇
（3）沉淀DNA 0.6倍体积的异丙醇。 （2）DNA纯化 CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)除去多糖，酚- 氯仿-异戊醇除去蛋白