2.TESS法小管提取质粒DNA 步骤 ⑤加入150μ溶液Ⅲ,冰上放置10min ⑥加入300μu氟仿,轻轻颠倒混匀,8000rpm 离心5min; ⑦转移上清至新的 Eppendorf管,加入2倍体积 无水乙醇(或者0.6倍体积的异丙醇), -20°℃C(或者室温)沉淀30min
步骤 ⑤ 加入150 l溶液III，冰上放置10 min； ⑥ 加入300 l氯仿，轻轻颠倒混匀，8 000 rpm 离心5 min； ⑦ 转移上清至新的Eppendorf管，加入2倍体积 无水乙醇（或者0.6倍体积的异丙醇 ）， −20℃（或者室温）沉淀30 min； 2 .TESS法小管提取质粒DNA
2.TESS法小管提取质粒DNA 步骤 ⑧12000『m离心5min,弃去上清; ⑨加入1m70%乙醇洗涤沉淀,12000rpm离 心5min,弃去上清,真空抽干; ⑩沉淀溶于适量ddH2O中,加入1~2; RNase a ,37℃消化30mn。-20°C保存
步骤 ⑧ 12 000 rpm离心5 min，弃去上清； ⑨ 加入1 ml 70%乙醇洗涤沉淀，12 000 rpm离 心5 min，弃去上清，真空抽干； ⑩ 沉淀溶于适量ddH2O中，加入1~2 l RNase A ，37℃消化30 min。−20℃保存。 2 .TESS法小管提取质粒DNA
3.使用试剂盒提取质粒DNA 以 Promega公司生产的试剂盒为例 ①挑取单菌落至1~10m液体LB(Ant)中,37℃C, 200pm振荡培养12~16h; ②收集1~5m菌液(含高拷贝质粒)或10m菌液(含 低拷贝质粒),10000『pm离心5min,弃上清, 离心管倒置于吸水纸上除去多余的菌液; ③加入200叫细胞重悬液( Cell Resuspension Solution),剧烈振荡,使细胞充分悬浮; ④加入250μ细胞裂解液(cl‖ Lysis Solution),轻 轻倒转几次,至溶液变澄清;
以Promega公司生产的试剂盒为例 ① 挑取单菌落至1~10 ml液体LB（Anti+）中，37℃, 200 rpm振荡培养12~16 h； ② 收集1~5 ml菌液（含高拷贝质粒）或10 ml菌液（含 低拷贝质粒），10 000 rpm离心5 min，弃上清， 离心管倒置于吸水纸上除去多余的菌液； ③ 加 入 200 l 细 胞 重 悬 液 （ Cell Resuspension Solution），剧烈振荡，使细胞充分悬浮； ④ 加入250 l细胞裂解液（Cell Lysis Solution），轻 轻倒转几次，至溶液变澄清； 3 .使用试剂盒提取质粒DNA
3.使用试剂盒提取质粒DNA 以 Promega公司生产的试剂盒为例 ⑤加入10μ碱减性蛋白酶( Alkaline Protease Solution) 轻轻倒转4次,室温放置5min(如果使用不编码 RNase的菌种,比如DH5α,此步可省); ⑥加入350μ中和液( Wizard plus sv neutralization Solution),迅速混匀,轻轻颠倒4次; ⑦室温,最大速(14000m)离心10min; ⑧将澄清的溶解液(~850μ)倾入柱中,小心沉淀勿 倒入;
以Promega公司生产的试剂盒为例 ⑤ 加入10 l碱性蛋白酶（Alkaline Protease Solution） ，轻轻倒转4次，室温放置5 min（如果使用不编码 RNase的菌种，比如DH5，此步可省）； ⑥ 加入350 l中和液（Wizard Plus SV Neutralization Solution），迅速混匀，轻轻颠倒4次； ⑦ 室温，最大速（14 000 rpm）离心10 min； ⑧ 将澄清的溶解液（~850 l）倾入柱中，小心沉淀勿 倒入； 3 .使用试剂盒提取质粒DNA
3.使用试剂盒提取质粒DNA 以 Promega公司生产的试剂盒为例 ⑨室温,最大速(14000rpm)离心1min,将收集 管中的滤液倾出,柱子插回原管; ⑩加入750μ事先用95%乙醇稀释后的洗柱液 Column Wash Solution),室温最大速(14000 rpm)离心2mn,将收集管中的滤液倾出,柱子 插回原管; ①将柱移到新灭菌的15 ml Eppendor管上,加入 100μu无酶ddH2O,室温最大速(14000mm)离 心1mn; ⑩②弃去柱子,-20℃保存所提质粒DNA
以Promega公司生产的试剂盒为例 ⑨ 室温，最大速（14 000 rpm）离心1 min，将收集 管中的滤液倾出，柱子插回原管； ⑩ 加入750 l事先用95%乙醇稀释后的洗柱液（ Column Wash Solution），室温最大速（14 000 rpm）离心2 min，将收集管中的滤液倾出，柱子 插回原管； ⑪ 将柱移到新灭菌的1.5 ml Eppendorf管上，加入 100 l无酶ddH2O，室温最大速（14 000 rpm）离 心1 min； ⑫ 弃去柱子，−20℃保存所提质粒DNA。 3 .使用试剂盒提取质粒DNA