2.哺乳动物细胞基因组DNA的抽提 一般过程及原理: (1)组织粉碎 动物组织剪成小块,置液氮中冻结后研磨成 细粉末。 组织培养的细胞用胰酶消化松散后直接使用
一般过程及原理： 动物组织剪成小块，置液氮中冻结后研磨成 细粉末。 组织培养的细胞用胰酶消化松散后直接使用。 （1）组织粉碎 2. 哺乳动物细胞基因组DNA的抽提
(2)细胞裂解 CH3(CH2)lrO--S-ONa 05%SDS和0.1mgm蛋白酶K。50温育。 SDS是离子型去垢剂( detergent),可以使 细胞膜崩解。 (3)纯化DNA 用苯酚和酚-氯仿抽提除去蛋白质污染。 (4)沉淀DNA 用2倍体积的无水乙醇。 (可以加入1/10体积的3M醋酸氨辅助沉淀) (5)除去RNA污染 用 RNase
0.5%SDS和0.1mg/ml蛋白酶K。50 oC温育。 （2）细胞裂解 （3）纯化DNA 用苯酚和酚-氯仿抽提除去蛋白质污染。 SDS是离子型去垢剂（detergent），可以使 细胞膜崩解。 CH3—(CH2) 11—O—S—ONa O O （5）除去RNA污染 用RNase。 用2倍体积的无水乙醇。 （4）沉淀DNA （可以加入1/10体积的3M醋酸氨辅助沉淀）
3.从植物组织中制备DNA 般过程及原理: (1)组织粉碎 用液氮冷冻后研磨成细粉末。 (2)细胞裂解 用2%CTAB2-ME(十六烷基三甲基溴化铵/2 巯基乙醇)。 或1%SDS和蛋白酶K。650温育佔h左右。 2%CTAB抽提缓冲液:CTAB10g;5MNaC|140ml;0.5 MEDTA 20m;1 MTris-C!(pH8.0)50ml;加dH2O定容至500ml
一般过程及原理： （1）组织粉碎 用液氮冷冻后研磨成细粉末。 3. 从植物组织中制备 DNA （2）细胞裂解 用2%CTAB/2-ME (十六烷基三甲基溴化铵/2- 巯基乙醇）。 或1% SDS和蛋白酶K。 65oC温育1h左右。 2% CTAB抽提缓冲液：CTAB 10 g；5 M NaCl 140 ml；0.5 M EDTA 20 ml；1 M Tris-Cl（pH 8.0） 50 ml；加ddH2O定容至500 ml
(3)纯化DNA 用苯酚和酚氯仿抽提除去蛋白质污染。 (4)沉淀DNA 用0.6倍体积的异丙醇(-20°)。 (可以加入1/10体积的3M醋酸氨辅助沉淀)。 (5)除去RNA污染 用 RNase A
用0.6倍体积的异丙醇（-20 oC）。 （3）纯化DNA 用苯酚和酚-氯仿抽提除去蛋白质污染。 （4）沉淀DNA （5）除去RNA污染 用RNase A。 （可以加入1/10体积的3M醋酸氨辅助沉淀）
、DNA的定量和纯度测定 1.紫外光谱法 原理: DNA(或RNA)在260m波长处有特 异的紫外吸收峰。 蛋白质在280nm处有吸收峰 用微量比色杯(10μ或50,100山)在紫 外分光光度计直接测定
1. 紫外光谱法 DNA（或 RNA）在260nm波长处有特 异的紫外吸收峰。 用微量比色杯（10l或50，100 l ）在紫 外分光光度计直接测定。 原理： 蛋白质在280nm处有吸收峰 三、DNA的定量和纯度测定