限制性核酸內切酶 限制性核酸内切酶的类型 主要特性 1型 ‖型 型 限制修饰 多功能 单功 双功能 蛋白结构异源三聚体 同源二聚体 异源二聚体 辅助因子 ATP Mg2SAM Mg ATP Mgz+ SAM 识别序列TGAN8TGCT旋转对称序列 GAGCC AACNGGTGC CAGCAG 切割位点距识别序列1kb处识别序列内或附近距识别序列下游 随机性切割 特异性切割 24-26bp处
限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶的类型 限制性核酸内切酶的类型 主要特性 主要特性 I I 型型 II II 型型 III III 型型 限制修饰 限制修饰 多功能 多功能 单功能 单功能 双功能 双功能 蛋白结构 蛋白结构 异源三聚体 异源三聚体 同源二聚体 同源二聚体 异源二聚体 异源二聚体 辅助因子 辅助因子 ATP Mg ATP Mg2+2+ SAM SAM ATP Mg Mg Mg2+2+ ATP Mg2+2+ SAM SAM 识别序列 识别序列 TGAN TGAN88TGCT TGCT 旋转对称序列 旋转对称序列 GAGCC GAGCC AACN AACN66GTGC GTGC CAGCAG CAGCAG 切割位点 切割位点 距识别序列 距识别序列1kb 1kb处处 识别序列内或附近 识别序列内或附近 距识别序列下游 距识别序列下游 随机性切割 随机性切割 特异性切割 特异性切割 24-26bp 24-26bp处处
限制性核酸內切酶 限制性核酸内切酶的命名 属名 种名株名 Haemophilus influenzae d嗜血流感杆菌d株 Hindl dⅢ 同一菌株中所含的多个不同的限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶的命名 限制性核酸内切酶的命名 属名 种名 株名 属名 种名 株名 H i n d III H i n d III H i n d III Haemophilus influenzae aemophilus influenzae d 嗜血流感杆菌d株 同一菌株中所含的多个不同的限制性核酸内切酶 同一菌株中所含的多个不同的限制性核酸内切酶
限制性核酸內切酶 Ⅱ型限制性核酸内切酶的基本特性 识别双链DNA分子中4-8对碱基的特定序列 大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧 别切割序列呈典型的旋转对称型回文结构 EcoR|的切割位点 EcoR|的识别序列 5∴ GCTGAATTCGAG∴..3 3∴ C GACTTAAGCTC∴.5
限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶 II II 型限制性核酸内切酶的基本特性 型限制性核酸内切酶的基本特性 识别双链DNA分子中4 - 8 对碱基的特定序列 对碱基的特定序列 大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧 大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧 识别切割序列呈典型的旋转对称型 识别切割序列呈典型的旋转对称型回文结构构 5‘ … G C T 5‘ … G C T G A A T T C G A G … 3’ G A A T T C G A G … 3’ 3‘ … C G A 3‘ … C G A C T T A A G C T C … 5’ C T T A A G C T C … 5’ EcoR I EcoR I的切割位点 的切割位点 EcoR I EcoR I的识别序列 的识别序列
EcoR等产生的5粘性末端 5∴ G-C-T-G-A-A-CGAG..3 3.cGAC-TA-A-GCTC∴.5 R|37C 5-C-T-G-OH P-A-A-T--C-G-A-G.3 3C-G-A-C-T-T-A-A-P OH-GCTC∴.5 退火47°C 5°. G-C-T-GA-A-T-T-C-G-A-G∴3 3∴cGAC-TA- A G-C-T-C∴.5 P OH
EcoRI EcoRI等产生的 等产生的5‘ 5‘粘性末端 粘性末端 5‘ … G 5‘ … G-C-T-G-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ -C-T-G-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3‘ … C 3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-G-C-T-C … 5’ -G-A-C-T-T-A-A-G-C-T-C … 5’ EcoRI 37 EcoRI 37 ℃℃ 5‘ … G 5‘ … G-C-T-G- -C-T-G-OH P OH P--A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3‘ … C 3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A- -G-A-C-T-T-A-A-P OH P OH--G-C-T-C … 5’ G-C-T-C … 5’ 退火退火 4-7 4-7 ℃℃ 5‘ … G 5‘ … G-C-T-G A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ -C-T-G A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3‘ … C 3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A G-C-T-C … 5’ -G-A-C-T-T-A-A G-C-T-C … 5’ OHOH PP PP OHOH
Pst等产生的3粘性末端 5∴GCTC=TG-0A-GGAG∴33 3C-G-A-G-A-C-GPT-C-C-T-C.5 Pst 37 C 5°.GCTC-TG-C-A-0H P-G-G-A-G∴3 3∴cGA-G-P OHA-C-G- I-C-C-T-C∴.53 退火47°C 5°∴ G-C-T-C--G-C- A G-G-A-G∴.3 3∴cGA-GA=C-G-CCTC∴.5 P OH
PstI PstI等产生的 等产生的3‘ 3‘粘性末端 粘性末端 5‘ … G 5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G … 3’ -C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G … 3’ 3‘ … C 3‘ … C-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’ -G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’ PstI 37 PstI 37 ℃℃ 5‘ … G 5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A- -C-T-C-T-G-C-A-OH P OH P--G-G-A-G … 3’ G-G-A-G … 3’ 3‘ … C 3‘ … C-G-A-G- -G-A-G-P OH P OH--A-C-G-T-C-C-T-C … 5’ A-C-G-T-C-C-T-C … 5’ 退火退火 4-7 4-7 ℃℃ 5‘ … G 5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A G-G-A-G … 3’ -C-T-C-T-G-C-A G-G-A-G … 3’ 3‘ … C 3‘ … C-G-A-G A-C-G-T-C-C-T-C … 5’ -G-A-G A-C-G-T-C-C-T-C … 5’ OHOH PP PP OHOH