生化奥验技术专题 主要内容和要求:以蛋白质分离纯化为例 介绍生物大分子分离纯化的一般步骤和注意事 项;介绍层析技术、电泳技术、离心技术的原 理及其应用;总结蛋白质、核酸、酶、氨基酸 测定的主要方法
生化实验技术专题 主要内容和要求：以蛋白质分离纯化为例 介绍生物大分子分离纯化的一般步骤和注意事 项；介绍层析技术、电泳技术、离心技术的原 理及其应用；总结蛋白质、核酸、酶、氨基酸 测定的主要方法
目录 第一节生物大分子物质的制备 第二节几种主要的生物化学实验技术 第三节生物分子的检测
第一节 生物大分子物质的制备 第二节 几种主要的生物化学实验技术 第三节 生物分子的检测
第一节生物大分子物质的制备 一般过程 材料的选择和处理 确立测定方法 细胞的破碎 有效成分的抽提 二.注意事项 有效成分的浓缩 纯化方案的设计和评价 例:宇佐美曲霉537酸性蛋白酶的纯化
第一节 生物大分子物质的制备 一．一般过程 二．注意事项 三．纯化方案的设计和评价 例：宇佐美曲霉537酸性蛋白酶的纯化 •材料的选择和处理 •确立测定方法 •细胞的破碎 •有效成分的抽提 •有效成分的浓缩
生物大分子分离纯化的一般步骤 层析法 电泳法 生物组织→无细胞提取液→粗产品→却、过}→结晶 超滤 ←前处理→|←粗分级→ 细分级→ 材料选择与处理 盐析(硫酸铵盐析) 细胞破碎(机械破 等点电沉淀 碎、溶账和自溶、 有机溶剂沉淀 酶解、化学处理) 透析
生物大分子分离纯化的一般步骤 层析法 电泳法 超离心法 超滤 •盐析（硫酸铵盐析） •等点电沉淀 •有机溶剂沉淀 •透析 │←前处理→│ ←粗分级→ │ ← 细分级 →│ •材料选择与处理 •细胞破碎（机械破 碎、溶账和自溶、 酶解、化学处理） 生物组织→无细胞提取液→粗产品→ →结晶
几种主要沉淀方法比较 方法 原理 优点 缺点 应用范围 操作筒便、分辨力差 成本低廉、纯化倍数蛋白质或 1.沉淀法蛋自质的对蛋白质低,蛋白质酶的分级 盐析作用 或酶有保沉淀中混沉淀和结 护作用,重杂大量盐|晶 复性较好分 对蛋自质|蛋白质、多 2.有机溶脱水作用操作简便:或酶有多糖等物 肽、核酸和 剂沉淀和降低介分辨力较性作用,成质的分级 法 电常数 强 本较高 沉淀 等电点、热 3.选择性变性和特强,高装|用范围烹分季物 质的沉淀 沉淀作用 多