生物技术专业按心课程 基因工 华东理工大学张惠展
生物技术专业核心课程 生物技术专业核心课程 基因工程 华东理工大学 张惠展 华东理工大学 张惠展
基因工程 1重组DNA技术与基因工程的基本概念 2重组DNA技术与基因工程的基本原理 3重组DNA技术所需的基本条件 4重组DNA技术的操作过程 5目的基因的克隆与基因文库的构建 6外源基因在大肠杆菌中的表达 7外源基因在酵母菌中的表达 8外源基因在哺乳动物细胞中的表达 9外源基因表达产物的分离纯化
基因工程 5 2 3 4 1 6 7 8 9 重组重组DNA DNA技术与基因工程的基本概念 技术与基因工程的基本概念 重组DNA技术与基因工程的基本原理 技术与基因工程的基本原理 重组DNA技术所需的基本条件 技术所需的基本条件 重组DNA技术的操作过程 技术的操作过程 目的基因的克隆与基因文库的构建 目的基因的克隆与基因文库的构建 外源基因在大肠杆菌中的表达 外源基因在大肠杆菌中的表达 外源基因在酵母菌中的表达 外源基因在酵母菌中的表达 外源基因在哺乳动物细胞中的表达 外源基因在哺乳动物细胞中的表达 外源基因表达产物的分离纯化 外源基因表达产物的分离纯化
9外源基因表达产物的分离纯化 A重组蛋白分离纯化方法选择的基本原则 B离子交换层析 C凝胶层析 D亲和层析 E膜分离 F原核生物表达的重组蛋白质量检测
D 亲和层析 9 外源基因表达产物的分离纯化 外源基因表达产物的分离纯化 C 凝胶层析 B 离子交换层析 A 重组蛋白分离纯化方法选择的基本原则 重组蛋白分离纯化方法选择的基本原则 F 原核生物表达的重组蛋白质量检测 原核生物表达的重组蛋白质量检测 E 膜分离
9外源基因表达产物的分离纯化 A重组蛋白分离纯化方法选择的基本原则 针对不同的产物表达形式采取不同的策略 针对不同性质的重组蛋白选择不同的层析类型 多种分离纯化技术的联合运用 ●合适分离纯化介质的选择 ●分离纯化过程的规模化
A 重组蛋白分离纯化方法选择的基本原则 重组蛋白分离纯化方法选择的基本原则 9 外源基因表达产物的分离纯化 外源基因表达产物的分离纯化 针对不同的产物表达形式采取不同的策略 针对不同的产物表达形式采取不同的策略 针对不同性质的重组蛋白选择不同的层析类型 针对不同性质的重组蛋白选择不同的层析类型 多种分离纯化技术的联合运用 多种分离纯化技术的联合运用 合适分离纯化介质的选择 合适分离纯化介质的选择 分离纯化过程的规模化 分离纯化过程的规模化
针对不同的产物表达形式采取不同的策略 采用分泌型战略表达重组蛋白,通常体积大、浓度低,因此应在 纯化之前采用沉淀或超滤等方法先进行浓缩处理; 采用包涵体型战略表达重组蛋白,应先离心回收包涵体; 采用融合型战略表达重组蛋白,一般是胞内可溶性的,拟首先选 用亲和层析进行纯化 表达在细胞膜和细胞壁之间的间隙中的蛋白质,应用低浓度的溶 菌酶处理,然后再用渗透压休克法释放重组蛋白
针对不同的产物表达形式采取不同的策略 针对不同的产物表达形式采取不同的策略 采用采用分泌型战略表达重组蛋白 分泌型战略表达重组蛋白，通常体积大、浓度低，因此应在 ，通常体积大、浓度低，因此应在 纯化之前采用沉淀或超滤等方法先进行浓缩处理； 纯化之前采用沉淀或超滤等方法先进行浓缩处理； 采用采用包涵体型战略表达重组蛋白，应先离心回收包涵体； 包涵体型战略表达重组蛋白，应先离心回收包涵体； 采用采用融合型战略表达重组蛋白 融合型战略表达重组蛋白，一般是胞内可溶性的，拟首先选 ，一般是胞内可溶性的，拟首先选 用亲和层析进行纯化 用亲和层析进行纯化 表达在细胞膜和细胞壁之间的间隙中 表达在细胞膜和细胞壁之间的间隙中的蛋白质，应用低浓度的溶 的蛋白质，应用低浓度的溶 菌酶处理，然后再用渗透压休克法释放重组蛋白。 菌酶处理，然后再用渗透压休克法释放重组蛋白