二、免疫胶乳比浊法 )原理 用抗体致敏的大小适中、均匀一致的脱乳颗粒(一般为0,2μm),在 遇到相应抗原时,胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合,引起胶乳颗粒 凝聚,使透射光和散射光即出现显著变化。如图所示:a为单个胶乳 颗粒不阻碍光线透过,b为抗原抗体结合形成的凝聚胶乳大颗粒使透 射光减弱或散射光增强。 光 抗体致敏 胶乳颗粒 2d+n atex Reagent Analyte Agglutination (a) Ob)
用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒（一般为0.2 μm），在 遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒 凝聚 ，使透射光和散射光即出现显著变化。如图所示：a为单个胶乳 颗粒不阻碍光线透过，b为抗原抗体结合形成的凝聚胶乳大颗粒使透 射光减弱或散射光增强。 二、免疫胶乳比浊法 （一）原理：
四川大荸华西医院 WEST CHINA HOSPITAL SICHUAN UNIVERSITY (二)方法评价 本法敏感度大大高于普通比浊法,可达ng水平 操作简便,易自动化;血清中的类风湿因子(RF)可 与gGFc段结合,使gG致敏胶乳颗粒出现非特异 性凝集,用Fab”)2片段代替lgG既可消除此干扰 又可克服lgG致敏胶乳的自凝现象;免疫胶乳轻度 自凝或抗体活性降低会严重影响结果
（二）方法评价 本法敏感度大大高于普通比浊法，可达ng/L水平， 操作简便，易自动化；血清中的类风湿因子(RF)可 与IgG Fc段结合，使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异 性凝集，用F(ab’)2片段代替IgG既可消除此干扰， 又可克服IgG致敏胶乳的自凝现象；免疫胶乳轻度 自凝或抗体活性降低会严重影响结果
四川大荸华西医院 WEST CHINA HOSPITAL SICHUAN UNIVERSITY 、免疫散射比浊法 原理 粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光 线照射后,微粒子对光线产生反射和折射而形成散 射光。悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒 的大小、数量、入射光的浪长和强度、测量角度等 因素密切相关,其公式如下
粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光 线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成散 射光。悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒 的大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等 因素密切相关，其公式如下： 三、免疫散射比浊法 原理
Ie= Io [4I2(dn/dc)2 Mc(1+cose)L Ny274 式Ie中为与入射光成0角处散射光强度;和为入 射光的浪长和强度;dn/dc为校正因子,反映了溶液折 射指数和颗粒浓度的变化;M为颗粒分子量;c为浓度 N为阿佛加德指数;γ为颗粒到检测器的距离;0为散 射光与入射光的夹角(散射夹角)
式I θ中为与入射光成θ角处散射光强度；λ和I0为入 射光的波长和强度；dn/dc为校正因子，反映了溶液折 射指数和颗粒浓度的变化；M为颗粒分子量；c为浓度； N为阿佛加德指数；γ为颗粒到检测器的距离；θ为散 射光与入射光的夹角（散射夹角）。 Iθ＝ I0［4π2（dn/dc) 2 Mc(1+cosθ)］ Nγ2λ 4
@ 四川大荸华西医院 WEST CHINA HOSPITAL SICHUAN UNIVERSITY 散射颗粒与散射光 两种散射: Rayleigh-散射(颗粒直径<入射光波长: 均匀散射)、Mil散射(颗粒直径≈或>入射光渡长: 不均匀散射) 大多数蛋白质分子直径比光浪长小很多,因而只产 生 Rayleigh-散射 Rayleigh散射:散射光的强度与复合物的量呈正比 与入射光波长成反比
• 两种散射：Rayleigh-散射（颗粒直径<<入射光波长: 均匀散射）、Mile-散射（颗粒直径≈或>入射光波长: 不均匀散射） • 大多数蛋白质分子直径比光波长小很多，因而只产 生Rayleigh-散射 • Rayleigh散射：散射光的强度与复合物的量呈正比、 与入射光波长成反比。 散射颗粒与散射光