3.1.2紫外一可见分光光度法(UV)基本原理 紫外可见分光光度法是选定一定波长的光 射被测物质溶液,测量其吸光度,再依据吸 光度计算出被测组分的含量。计算的理论根 据是“吸收定律”,朗伯一比尔定律 A= KCL 式中,A—吸光度 溶液浓度 L—液层厚度; K—比例常数
3.1.2紫外一可见分光光度法(UV)基本原理 ▪ 紫外可见分光光度法是选定一定波长的光照 射被测物质溶液，测量其吸光度，再依据吸 光度计算出被测组分的含量。计算的理论根 据是“吸收定律”, 朗伯—比尔定律
3.1.2紫外一可见分光光度法(UV)基本原理 说明 (1)必须是在使用适当波长的单色光为人射光的条件下, 吸收定律才成立。单色光越纯,吸收定律越准确。 (2)并非仼何浓度的溶液都遵守吸收定律。稀溶液均遵守 吸收定律,浓度过大时,将产生偏离。 (3)吸收定律能够用于那些彼此不相互作用的多组分溶液, 它们的吸收光度具有加合性,即溶液对某一波长光的吸 收等于溶液中各个组分对该波长光的吸收之和 (4)吸收定律中的比例系数尺称为“吸收系数”。它与很 多因素有关,包括入射光的波长、温度、溶剂性质及吸 收物质的性质
3.1.2紫外一可见分光光度法(UV)基本原理 ▪ 说明: (1)必须是在使用适当波长的单色光为人射光的条件下， 吸收定律才成立。单色光越纯，吸收定律越准确。 (2)并非任何浓度的溶液都遵守吸收定律。稀溶液均遵守 吸收定律，浓度过大时，将产生偏离。 (3)吸收定律能够用于那些彼此不相互作用的多组分溶液， 它们的吸收光度具有加合性，即溶液对某一波长光的吸 收等于溶液中各个组分对该波长光的吸收之和 (4)吸收定律中的比例系数尺称为“吸收系数”。它与很 多因素有关，包括入射光的波长、温度、溶剂性质及吸 收物质的性质
3.1.2紫外一可见分光光度法(UV)基本原理 2.定量分析方法: )标准曲线法 适用范围: 样品易模拟 批量样品 配制一系列已知浓度的标准溶液,在一定被长的单色光作 用下;测得其吸光度分,然后以吸光度为级坐标以浓度 比尔定律 直线。此直线称为标推曲线。在测未知浓度的溶液时,只 要在相同测定条件下测得其吸光度,即可由标准曲线上查 得其未知液的浓度 注意 经常检查工作曲线 注意单位变化 。注意测定条件
3.1.2紫外一可见分光光度法(UV)基本原理 2. 定量分析方法: ① 标准曲线法 ▪ 适用范围: • 样品易模拟 • 批量样品 ▪ 配制一系列已知浓度的标准溶液，在一定被长的单色光作 用下，测得其吸光度分，然后以吸光度为纵坐标．以浓度 为横坐标作图。若该溶液遵守朗伯—比尔定律，即划出一 直线。此直线称为标推曲线。在测未知浓度的溶液时，只 要在相同测定条件下测得其吸光度，即可由标准曲线上查 得其未知液的浓度 ▪ 注意: • 经常检查工作曲线 • 注意单位变化 • 注意测定条件
3.1.2紫外一可见分光光度法(UV)基本原理 ②标样推算法 用一标准溶液Cs,测得其吸光度As;然后在相同条件下测得待测液的吸光度Ax,则 C A% Ax c
3.1.2紫外一可见分光光度法(UV)基本原理 ② 标样推算法
3.1.2紫外一可见分光光度法(UV)基本原理 ③差示光度法 差示光度法是用一个已知浓度的标准溶液作参比,与未知 浓度的待测溶液比较,测量其吸光度,即: E(O CR)L 式中:As用作参比的标准溶液的吸光度 Ax—待测溶液的吸光度。 A=AX-As
3.1.2紫外一可见分光光度法(UV)基本原理 ③ 差示光度法 ▪ 差示光度法是用一个已知浓度的标准溶液作参比，与未知 浓度的待测溶液比较，测量其吸光度，即： ▪ A=Ax-As