第四章高效液相色谱分析（HPLC）教学目的和要求：1、了解高效液相色谱法的特点及影响色谱峰扩展及色谱分离的因素。2、掌握高效液相色谱法的主要类型及其分离原理，熟悉常用的固定相和流动相，初步具有根据样品性质选择适当的高效液相色谱法的能力。3、熟悉高效液相色谱仪。讲授内容提要：$3-1高效液相色谱法的特点$3-2影响色谱峰扩展及色谱分离的因素$3-3高效液相色谱法的主要类型及其分离原理$3-4液相色谱法固定相$3-5液相色谱法流动相83-6高效液相色谱仪$3-7高效液相色谱分离类型的选择$3-8高效液相色谱法应用实例教学重点难点：$3-2影响色谱峰扩展及色谱分离的因素3-3高效液相色谱法的主要类型及其分离原理解决方法：1、结合气相色谱分离理论进行对比学习2、从液相色谱所用的固定相、流动相及其性质，探讨、解决高效液相色谱法的主要类型及其分离原理。3、课后布置学生对高效液相色谱法的主要类型及其分离原理进行归纳总结，以加深学生的理解和掌握教学时数：4学时教学方法：以问题为导向，案例教学、课堂讨论相结合的讲授方式第一节高效液相色谱的特点与仪器一、液相色谱仪器highperformanceliquidchromatograph岛津高效液相色谱仪LC一10A系列：HP1050系列液相色谱仪：WATERSLC一600系列：二、高效液相色谱法的特点featureofHPLC特点：高压、高效、高速、高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。尚P三、流程及主要部件processandmainassemblyofHPLC(o进样器CE高压泵-中U分离柱0用p忙液瓶检测器记录仪废液2.主要部件流动相出口(1）高压输液泵密封垫主要部件之一，压力：150～350×105Pa。住塞单向阁信心特流动相进口
第四章 高效液相色谱分析（HPLC） 教学目的和要求： 1、 了解高效液相色谱法的特点及影响色谱峰扩展及色谱分离的因素。 2、 掌握高效液相色谱法的主要类型及其分离原理，熟悉常用的固定相和流动相，初步具有根据样品 性质选择适当的高效液相色谱法的能力。 3、 熟悉高效液相色谱仪。 讲授内容提要： §3-1 高效液相色谱法的特点 §3-2 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 §3-3 高效液相色谱法的主要类型及其分离原理 §3-4 液相色谱法固定相 §3-5 液相色谱法流动相 §3-6 高效液相色谱仪 §3-7 高效液相色谱分离类型的选择 §3-8 高效液相色谱法应用实例 教学重点难点： §3-2 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 §3-3 高效液相色谱法的主要类型及其分离原理 解决方法： 1、 结合气相色谱分离理论进行对比学习 2、 从液相色谱所用的固定相、流动相及其性质，探讨、解决高效液相色谱法的主要类型及其分离原 理。 3、 课后布置学生对高效液相色谱法的主要类型及其分离原理进行归纳总结，以加深学生的理解和掌 握 教学时数：4 学时 教学方法：以问题为导向，案例教学、课堂讨论相结合的讲授方式 第一节高效液相色谱的特点与仪器 一、液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph 岛津高效液相色谱仪 LC－10A 系列；HP1050 系列液相色谱仪；WATERS LC－600 系列； 二、高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 特点：高压、高效、高速、高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 三、流程及主要部件 process and main assembly of HPLC 2.主要部件 (1) 高压输液泵 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa
为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10um），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性4(2)梯度淋洗装置溶剂A、比例阀（溶剂混合点）高压梯度：利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送溶剂A昆合器入梯度混合室，混合后进入色谱柱。混合器溶剂B低压梯度：一台高压泵，通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一（溶剂混合点）溶剂B泵B定的比例抽入高压泵中混合。(3)进样装置高压梯度低压梯度使吕流路中为高压力工作状态，昌昌韩吕通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：(4)高效分离柱柱体为直型不锈钢管，内径1~6mm，柱长5～40cm。发展趋流动相流动相+入口入口色谱住色造生势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。入口(5)液相色谱检测器准备状态k进样状态a.紫外检测器应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：灵敏度高：线形范围高；R流通池可很小（1mm×10mm容积8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，3-遮光板1-低压乘灯2-透镜1-测量池修双紫外光数电晶5-比池6-紫外请光片易于操作：可用于梯度洗脱。b.光电二极管阵列检测器紫外检测器的重要进展；光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。二极管阵列检测器老R人进平度有色谱平面福e雅C波长时间一美式一新管吃店示差折光检测器（differentialrefractiveindexdetector）C除紫外检测器之外应用最多的检测器：可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比：通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）：灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱：偏转式、反射式和干涉型三种：荧光检测器（fluorescencedetector）高灵敏度、高选择性：对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、叶啉类化合物、d.农药、药物、氨基酸、留类化合物等有响应；@作流参比流路炎光检洲器示盘图偏转式差示折光检测器光路图图一透镜，光电倍增管：2发射滤光片：31.鸽丝灯光源2.透镜3.滤光片4.遮光板5.反射镜一样品流通池：5光源：7一透镜1透镜：6-6.透镜7.工作池8.参比池9.平面反射镜11.校镜12.光电管激发滤光片。10.平面细调透镜
为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、 高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 (2)梯度淋洗装置 高压梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送 入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 低压梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一 定的比例抽入高压泵中混合。 (3) 进样装置 流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示： (4) 高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径 1～6 mm，柱长 5～40 cm。发展趋 势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 (5) 液相色谱检测器 a. 紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点： 灵敏度高； 线形范围高； 流通池可很小（1mm × 10mm 容积 8μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选， 易于操作； 可用于梯度洗脱。 b. 光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展；光电二极管阵列检测器：1024 个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理， 三维立体谱图，如图所示。 c. 示差折光检测器（differential refractive index detector） 除紫外检测器之外应用最多的检测器；可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比；通用 型检测器（每种物质具有不同的折光指数）；灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；偏转式、反射式和干涉型三种； d. 荧光检测器（fluorescence detector）高灵敏度、高选择性；对多环芳烃，维生素 B、黄曲霉素、卟啉类化合物、 农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；
第二节主要分离类型与原理液-固吸附色谱liquid-solidadsorptionchromatography1基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸：2.固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10m的硅胶吸附剂：3.流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性：缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾。液-固吸附分离固定相种类：硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等：结构类型：全多孔型和薄壳型：粒度：5~10um：4.影响分离选择性的因素官能团的类型、数目、分子极性、空间构型等决定吸附作用的强弱。（1）不同极性或相同极性不同数量极性基团的样品吸附能力不同。（2）溶质分子中官能团的性质觉得洗脱顺序。（3）保留值大小也与空间效应有关。为了得到最大吸附，分子必须能与吸附剂表面平行排列。结论：LSC对化合物的类型具有选择性。它对异构体的分离选择性远大于其它色谱法。5.应用applicationofLSC1.环境中有机氯农药残留量分析固定相：薄壳型硅胶(37~50μm)流动相：正烷流速：1.5mL/min色谱柱：50cm×2.5mm(内径）检测器：差示折光检测器可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。1.艾民剂2:D-666恩民剂二、液-液分配色谱与化学键合相色谱（一）LLC固定相与流动相均为液体（互不相溶）：1.基本原理：组分在固定相和流动相上的分配：2.固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用：3.流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相normalphase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相reversephase）。正相与反相的出峰顺序相反：4.流动相类别按流动相组成分：单组分和多组分：按极性分：极性、弱极性、非极性：按使用方式分：固定组成洗脱和梯度洗脱。常用溶剂：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙睛、水。采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。5.流动相选择在选择流动相时，流动相的极性是选择的重要依据。采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。：也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。常用溶剂的极性顺序：水(最大）>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六环>四氢喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>异丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油（最小）6.选择流动相时应注意的几个问题（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失：酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。（3）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。（二）化学键合固定相bondedphases chromatogrophy：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。目前应用最广、性能最佳的固定相。a.硅氧碳键型：0=Si-0-C0Si-OHSb.硅氧硅碳键型：=Si-O-Si一C稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广：Si-OH+.c.硅碳键型：=Si-CSi-OHd.硅氮键型：=Si-N化学键合固定相的特点（1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快：（2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击：耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定：（3）选择性好03010201.苯2.茶3.联苯4菲5.葱6.荧葱7.花8,10.未知11.苯并花（e)12.苯并花（a)
第二节 主要分离类型与原理 一、 液-固吸附色谱 liquid-solid adsorption chromatography 1 .基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；2. 固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是 5～ 10μm 的硅胶吸附剂；3. 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有 官能团的化合物和异构体有较高选择性；缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾。液-固吸附分离固定相种类：硅胶、氧化 铝、分子筛、聚酰胺等；结构类型：全多孔型和薄壳型；粒度：5～10 μm； 4.影响分离选择性的因素 官能团的类型、数目、分子极性、空间构型等决定吸附作用的强弱。 （1）不同极性或相同极性不同数量极性基团的样品， 吸附能力不同。 （2）溶质分子中官能团的性质觉得洗脱顺序。（3）保留值大小也与空间效应有关。为了得到最大吸附，分 子必须能与吸附剂表面平行排列。 结论：LSC 对化合物的类型具有选择性。它对异构体的分离选择性远大于其它色谱法。 5.应用 application of LSC 1. 环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm2.5mm(内径) 检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。 二、 液-液分配色谱与化学键合相色谱 （一）LLC 固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 1.基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；2.固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；3.流动相：对于亲水 性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液 的极性（反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反；4. 流动相类别 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性 分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成洗脱和梯度洗脱。 常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、 乙醇、乙腈、水。采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时 间。 5. 流动相选择 在选择流动相时，流动相的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时 间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) > 甲酰胺> 乙腈> 甲醇> 乙醇> 丙醇> 丙酮> 二氧六环> 四氢呋喃> 甲乙 酮> 正丁醇> 乙酸乙酯> 乙醚> 异丙醚> 二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油(最小) 6. 选择流动相时应注意的几个问题 （1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 （3）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。 （二） 化学键合固定相 bonded phases chromatogrophy：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟 基上。目前应用最广、性能最佳的固定相。 a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N 化学键合固定相的特点 （1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快；（2）寿命长，化学键合， 无固定液流失，耐流动相冲击；耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； （3）选择性好
可键合不同官能团，提高选择性：（4）有利于梯度洗脱；存在着双重分离机制：（键合基团的覆盖率决定分离机理)高覆盖率：分配为主：低覆盖率：吸附为主：（稠环芳烃多为致癌物质）。例：耦环芳烃的分析固定相：十八烷基硅烷化键合相：流动相：20%甲醇-水100%甲醇：线性梯度淋洗，2%/min：：流速：ImL/min；柱温：50℃C：柱压：70×104Pa：检测器：紫外检测器三、离子交换色谱ion-exchangechromatography?固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂：流动相：HCSO4SO4阴离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液：阳离子离子交换树脂作固司SO4定相，采用酸性水溶液：基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换SO1NSO4反应：组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等SO4有关。亲和力大，保留时间长：SO4SO4阳离子交换：R-SO3H+M+=R-SO3M+H+H阴离子交换：R-NR4OH+X-=RNR4X+OH-SO4SO4应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。HSO4离子交换色谱分离固定相SO4SO4结构类别：（1）薄壳型离子交换树脂：薄壳玻璃珠为担体，表面涂约1%的SO4S04H离子交换树脂：（2）离子交换键合固定相薄壳键合型：微粒硅胶键合型（键SO4合离子交换基团）树脂类别：（1）阳离子交换树脂（强酸性、弱酸性）（2）阴离子交换树脂（强碱性、弱碱性）四、离子对色谱ionpairchromatography原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配：阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子：阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子：反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C-18柱)，含有对离子Y+的甲醇-水或乙-水作为流动相，试样离子X-进入流动相后，生成疏水性离子对Y+X-后：在两相间分配。五、离子色谱ionchromatography离子色谱是在20世纪70年代中期发展起来的一种技术，其与离子交换色谱的区别是其采用了特制的、具有极低交换容量的离子交换树脂作为柱填料，并采用淋洗液抑制技术和电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法。1.离子色谱法原理即离子交换原理，与传统离子交换的不同点：A采用交换容量非常低的特制离子交换树脂为固定相：通常在0.01～0.05毫摩尔/克于树脂。B细颗粒柱填料，高柱效：采用高压输液泵：C低浓度淋洗液或本进祥器0底电导抑制（在分离柱后，采用抑制柱来消除淋洗液的高本底电导）：D可采用电导检测器，快速分离分析微量无机离子混合物：酒開战高量交换树胎.2.高子色谱装置类型NaOH淋洗液suppressedapparatusofIC高容量抑制柱抑制型：抑制柱型、连续抑制型阳（威阴）器子、交换树胎2非抑制型：当进一步降低分离柱中树脂的交换容量(0.007～0.07毫摩尔/克干树脂)使已录仪停号用低浓度、低电离度的有机弱酸及弱酸盐作洗脱液，如苯甲酸、苯甲酸盐等。检测腹液器可直接与分离柱相连，不需抑制柱。离子色谱连续抑制装置图离子色谱连续抑制原理图
可键合不同官能团，提高选择性；（4）有利于梯度洗脱； 存在着双重分离机制：(键合基团的覆盖率决定分离机理) 高覆盖率：分配为主； 低覆盖率：吸附为主； 例： 稠环芳烃的分析 （稠环芳烃多为致癌物质）。 固定相：十八烷基硅烷化键合相； 流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇；线性梯度淋洗，2%/min； 流 速：1mL/min； 柱 温：50 ºC； 柱 压：70 104 Pa ； 检测器：紫外检测器 三、 离子交换色谱 ion-exchange chromatography 固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂； 流动相： 阴离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；阳离子离子交换树脂作固 定相，采用酸性水溶液； 基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换 反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等 有关。亲和力大，保留时间长； 阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H + 阴离子交换：R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH- 应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。 离子交换色谱分离固定相 结构类别：（1）薄壳型离子交换树脂； 薄壳玻璃珠为担体，表面涂约 1%的 离子交换树脂；（2）离子交换键合固定相 薄壳键合型；微粒硅胶键合型（键 合离子交换基团） 树脂类别：（1） 阳离子交换树脂（强酸性、弱酸性）（2） 阴离子交换树脂（强碱性、弱碱性） 四、 离子对色谱 ion pair chromatography 原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水性离子 对化合物，使其能够在两相之间进行分配； 阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作 为对离子； 阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子； 反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C-18 柱)，含有对离子 Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离子 X-进入流动相后，生成疏水性离子对 Y+ X -后；在两相间分 配。 五、 离子色谱 ion chromatography 离子色谱是在 20 世纪 70 年代中期发展起来的一种技术，其与离子交换色谱的区别是其采用了特制的、具有极低交换容量的 离子交换树脂作为柱填料，并采用淋洗液抑制技术和电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法。 1.离子色谱法原理 即离子交换原理，与传统离子交换的不同点：A 采用交换容量非常低的特制离子交换树脂为固定相；通常在 0.01～0.05 毫 摩尔/克干树脂。B 细颗粒柱填料，高柱效；采用高压输液泵；C 低浓度淋洗液或本 底电导抑制（在分离柱后，采用抑制柱来消除淋洗液的高本底电导）；D 可采用电导 检测器，快速分离分析微量无机离子混合物； 2.离子色谱装置类型 suppressed apparatus of IC 抑制型：抑制柱型、连续抑制型 非抑制型: 当进一步降低分离柱中树脂的交换容量(0.007～0.07 毫摩尔/克干树脂),使 用低浓度、低电离度的有机弱酸及弱酸盐作洗脱液，如苯甲酸、苯甲酸盐等。检测 器可直接与分离柱相连，不需抑制柱。 离子色谱连续抑制装置图 离子色谱连续抑制原理图
羊器NAOH情富季交换树脂NaOH淋洗液H2O磺化纤维管再生泵抑制器磺化纤维管作用示意图信号记录仪检器废液五再生演3.离子色谱的应用applicationofICPOA阴高子分析：双柱：薄壳型阴离子交换树脂分离柱（3×250mm）流动相：0.003mol-L-1NaHCO3/0.0024mol-L-1Na2CO3，流量138mL/hr。七种阴离子在20分钟内基本上得到完全分离，各组分含量在3~50ppm。六、亲和色谱（AC)Affinitychromatograph20ni12min1015(a)(b)原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异B七种标阴离子分离谱图性亲和力，进行选择性分离。先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔臂（环氧、联胺等），再连接上配基（酶、抗原等），这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改变淋洗液后洗脱。七、分离类型选择choiceofseparationtypes表液相色谱分离类型选择参考表间隔基手臂亲和物其他组分海超备大大司新源二扫里包造动城不车水展惠家全出专党载一黄整色异薄家流动分子大小我剪精色尝相体广茂根裤一接热选禁平真不馆装和物精里包消，水为流箱板#一家#子安美您送#子农#海游罗套子安统色游格于水，毫子与非离子亲和色谱法示意图医财售意第三节超临界色谱超临界流体色谱的特点与原理principleandcharacterofsupercriticalfluidchromatography1.概述超临界流体：在高于临界压力与临界温度时，物质的一种状态。性质介3液志临界点于液体和气体之间。超临界流体色谱(SFC)，80年代快速发展，具有液相、气相色谱不具有的优点：（1）可处理高沸点、不挥发试样：（2）比LC有更高周态的柱效和分离效率。气态三相点2.超临界流体性质T/OC（1）性质介于液体和气体之间；具有气体的低黏度、液体的高密度，扩散系数纯物质的相图位于两者之间。（2）可通过改变超临界流体的密度表一些超临界流体的性质（程序改变）调节组分分离（类似于气相色谱的程在4×10°P下的超临界点的流体超临界压力/x10Pa距临界温度/℃序升温，液相色谱中的梯度淋洗）。超临界流体的密度/g·cm*"密度/g.cmCO,31.172.90.470.9密度与压力有关。N,O71.70.4536.50.94NH,132.511.280.240.40"-C,H,0.23152037.50.50
3.离子色谱的应用 application of IC 阴离子分析: 双柱；薄壳型阴离子交换树脂分离柱(3×250mm), 流动相： 0.003mol·L-1 NaHCO3 / 0.0024 mol·L-1 Na2CO3，流量 138 mL/hr。七种阴离子在 20 分钟内基 本上得到完全分离，各组分含量在 3～50 ppm。 六、亲和色谱(AC) Affinity chromatograph 原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异 性亲和力，进行选择性分离。先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔臂(环氧、联胺等)，再连接上配基(酶、 抗原等)，这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改变淋洗液后洗脱。 七、分离类型选择 choice of separation types 第三节 超临界色谱 一、超临界流体色谱的特点与原理 principle and character of supercritical fluid chromatography 1.概述 超临界流体：在高于临界压力与临界温度时，物质的一种状态。性质介 于液体和气体之间。 超临界流体色谱(SFC)，80 年代快速发展，具有液相、 气相色谱不具有的优点:（1）可处理高沸点、不挥发试样；（2）比 LC 有更高 的柱效和分离效率。 2. 超临界流体性质 （1）性质介于液体和气体之间; 具有气体的低黏度、液体的高密度，扩散系数 位于两者之间。（2）可通过改变超临界流体的密度 （程序改变）调节组分分离（类似于气相色谱的程 序升温，液相色谱中的梯度淋洗）。 超临界流体的 密度与压力有关