限制性内切核酸酶 (restriction enzymes) 能识别双链DNA分子中一段特异的核苷酸序列, 在这一段序列内将双链DNA分子切断。 ●功能:降解外来DNA分子,以限制( restriction 或阻止病毒侵染 是细菌细胞为防御异源遗传物质进入的一种有 效方式
6 限制性内切核酸酶 (restriction enzymes) ⚫ 能识别双链DNA分子中一段特异的核苷酸序列， 在这一段序列内将双链DNA分子切断。 ⚫ 功能：降解外来DNA分子，以限制(restriction ) 或阻止病毒侵染 ⚫ 是细菌细胞为防御异源遗传物质进入的一种有 效方式
限制性內切酶分类 第Ⅰ类限制性酶:每隔一段DNA序列随机切割双链 DNA分子,没有序列特异性 第Ⅱ类限制性酶:能识别一段特异的DNA序列,准确 地酶切双链DNA的特异序列 识别的序列是对称的,即在一条链中从5到3方向 的序列,与其互补链从5到3方向的序列完全相同 这种从两个方向阅读而序列相同的序列称为回 称序列( palindrome)( ECoR I) 另一类酶,如SmaⅠ,它们酶切DNA双链后,产生 的DNA片段具有平齐末端( blunt ends)
7 限制性内切酶分类 ⚫ 第Ⅰ类限制性酶：每隔一段DNA序列随机切割双链 DNA分子，没有序列特异性 ⚫ 第Ⅱ类限制性酶：能识别一段特异的DNA序列，准确 地酶切双链DNA的特异序列 – 识别的序列是对称的，即在一条链中从5’到3’方向 的序列，与其互补链从5’到3’方向的序列完全相同。 这种从两个方向阅读而序列相同的序列称为回纹对 称序列(palindrome)（EcoRⅠ） – 另一类酶，如SmaⅠ，它们酶切DNA双链后，产生 的DNA片段具有平齐末端(blunt ends)
限制性酶coR识别位点(粘性末端) Recognition site 5 G-A-A-T-T-C 3 C-T-T-A-A-G Treatment with EcoRI G A-A-T-T-C 3 Complementary tails C-T-T-A-A 5
8 限制性酶EcoRI识别位点（粘性末端）
EcoRI酶切不同来源的DNA及退火重组 G-AAT-T-CTTT G-A·A-T·TC C·T-TA·A-G C-TT-A·A-G Cleavage with ECoRI Cleavage with EcoRI A·A·TT·C Fragments with C-T-T-A-A complementary tails Gap Annealing allows recombinant GA-A-TT-C DNA molecules to form by complementary base pairing C·T-T-A·A1G The two strands are not covalently bonded as indicated by shaded gaps DNA ligase G-A·A·T-T-C DNA ligase seals the gaps, covalently bonding the C·T·T-A-A.G two strands
9 EcoRI酶切不同来源的DNA及退火重组
平齐末端(SmaI) 5--CCCGGG--3 GGGCCC--5 5—cCc GGG—3 3'-GGG CCC-5
10 平齐末端（SmaⅠ）