Questions A、po萃取? B、胞内酶的萃取? C、包含体的pro复性?
Questions A、pro萃取？ B、胞内酶的萃取？ C、包含体的pro复性?
第11章双水相萃取 双水相系统 aqueous two- phase systen,ATPS) PEGPEG PEG PEG 十 KPi KPi Dⅹ Dⅹ PEG=聚已二醇( polyethylene glycol) Kpi=磷酸钾 1、Pro如何分布 DX=葡聚糖( dextran 2、影响因素 3、应用
第11章 双水相萃取 双水相系统(aqueous two-phase systen, ATPS) PEG = 聚已二醇(polyethylene glycol) Kpi = 磷酸钾 DX = 葡聚糖(dextran) 1、Pro如何分布 2、影响因素 3、应用
第11章双水相萃取 1、ATPS相图 2、蛋白质的分配平衡 3、影响蛋白质m的综合因素 4、体系的选择和优化 5、 applications
第11章 双水相萃取 1、 ATPS相图 2、 蛋白质的分配平衡 3、 影响蛋白质m的综合因素 4、 体系的选择和优化 5、 Applications
1ATPS相图 双节线(bi-noda) 图中的曲线。双节线以下的区域为均相区,3 以上的区域为两相区,即ATPS 系线 tie line) 双节线上两点的直线 系线 tie line)反映的信息 A杠杆规则系线上各点均为分成组成相同 而体积不同的两相。两相体积近似服从杠 杆规 BM 10 B性质差异:系线的长度是衡量两相 相对差别的尺度,系线越长,两相间 性质差别越大;反之则越 B C临界点 critical-point):当系线长度趋 零时,两相差别消失任何溶质在两 KPi质量分数/% 相中的分配系数均为1。如K点。 双水相系统相图PEG6000/KPi
1 ATPS相图 双节线(bi-nodal)： 图中的曲线。双节线以下的区域为均相区, 以上的区域为两相区，即ATPS 。 系线(tie line)： 双节线上两点的直线。 系线(tie line)反映的信息 A 杠杆规则：系线上各点均为分成组成相同， 而体积不同的两相。两相体积近似服从杠 杆规则 B 性质差异：系线的长度是衡量两相间 相对差别的尺度,系线越长,两相间的 性质差别越大；反之则越小. C 临界点(critical point)：当系线长度趋 于零时, 两相差别消失,任何溶质在两 相中的分配系数均为1。如K点
2蛋白质的分配平衡 1)、分配系数m x 木瓜蛋白酶 2)、m贡献因子 胰蛋白醇 ln三n肌十血,+ln a-胰凝乳蛋白酶 m和m2分别为静电、疏水和亲 和作用对溶质m的贡献 廠也离掘 卵白蛋白 3)、静电作用 0.5 铁传递蛋白 电中性p的m: mo=-M4y/RT a·淀粉酶 式中,M:溶质分子量;,AY:溶质在上下 两相表面自由能的差,Jmol 02 意义: 牛血清白蛋白 A不受静电作用的影响(因不带电)0 B一般△y>0,溶质1nm随M个而 C ATPS不同同溶质的Aγ也就不004t6+k 同,m随ATPS不同而改变 图是不同po在pH为各pro的p的ATPS M×104 中的m 双水相中溶质的分配系数与相对分子质量的关系 4.4%PEG80007%DxT500,20℃
2 蛋白质的分配平衡 1)、分配系数m 2)、m贡献因子 me、mb和ma分别为静电、疏水和亲 和作用对溶质m的贡献. 3)、静电作用 电中性pro的m0： 式中, M: 溶质分子量; : 溶质在上下 两相表面自由能的差,J/mol。 意义： A 不受静电作用的影响(因不带电); B 一般 > 0，溶质lnm随M而； C ATPS不同, 同一溶质的也就不 同，m随ATPS不同而改变。 图是不同pro在pH为各pro的pI的ATPS 中的m