制备细胞核 高盐(NaCl)溶液 抽提组蛋白 MAR CODD 的分离 限制性内切 酶消化DNA 用 DNase降解 所有DNA < 1 MAR 提取DNA 提取并分析DA MAR一3
MAR 的 分 离
寺征 MAR和SAR的特 1)当用交联剂如EtB处理提取的真核细胞核时,部分解旋 的DNA可从细胞核中突出形成25-600kb长的环突 2)这些环突的DNA基部与细胞核基质紧密结合,将染色 体DNA分成相对独立的结构区域 3)与细胞核基质结合的DNA顺序(基质附着区,MAR)含 有较高比例的AT,约占总DNA的10% 4)拓扑酶Ⅱ可与MAR结合,因此推测MAR成分与DNA 复制有关 5)SAR可用二碘水扬酸铝分离,MAR则用高盐NaCI溶 液分离 6)MAR或SAR之间的距离平均为30kb,染色体DNA环 突长约25-600kb,因此并非所有MAR或SAR均与基 质或骨架结合或这说MAR(或SAR)与基质或骨架结 合的位置是动态的,不固定的
MAR和SAR的特征 1) 当用交联剂如EtB处理提取的真核细胞核时,部分解旋 的DNA可从细胞核中突出形成25-600 kb长的环突. 2) 这些环突的DNA基部与细胞核基质紧密结合, 将染色 体DNA分成相对独立的结构区域. 3) 与细胞核基质结合的DNA顺序(基质附着区, MAR)含 有较高比例的AT, 约占总DNA的10%. 4) 拓扑酶II可与MAR结合, 因此推测MAR成分与DNA 复制有关. 5) SAR可用二碘水扬酸铝分离, MAR则用高盐NaCl溶 液分离. 6) MAR或SAR之间的距离平均为30 kb, 染色体DNA环 突长约25-600 kb, 因此并非所有MAR或SAR均与基 质或骨架结合. 或这说MAR(或SAR)与基质或骨架结 合的位置是动态的, 不固定的
sAR和MAR的应用 由于发现许多功能基因的两侧含有SAR或 MAR的结构并证实SAR和MAR具有阻止 异染色质位置效应和隔离相邻基因彼此干 扰的功能,因此为了提高转基因的表达水平 在构建表达载体时可在基因两侧安装SAR 或MAR顺序,以减少转基因沉默效应
SAR和MAR的应用 由于发现许多功能基因的两侧含有SAR或 MAR的结构,并证实SAR和MAR具有阻止 异染色质位置效应和隔离相邻基因彼此干 扰的功能, 因此为了提高转基因的表达水平, 在构建表达载体时可在基因两侧安装SAR 或MAR顺序, 以减少转基因沉默效应
什么是CpG岛 满足CpG岛的条件为: 1连续200bp的DNA顺序(已修改为00bp); 2.C+G含量大于50%(已修改为55%); 3观测到的CpG双碱基数目与预期的数目 之比大于06(已修改为0.65) (Gardiner-Garden,J Mol Bio, 196: 261, 1987: Proc Natl Acad Sci USA 99: 3740-3745, 2002)
什么是CpG岛 满足CpG岛的条件为: 1. 连续200 bp的DNA顺序(已修改为500 bp); 2. C+G含量大于50%(已修改为55%); 3. 观测到的CpG双碱基数目与预期的数目 之比大于0.6(已修改为0.65). (Gardiner-Garden, J.Mol.Bio., 196:261, 1987; Proc Natl Acad Sci USA 99:3740-3745, 2002 )
cpG岛的一般特点 1)主要在脊椎动物中发现其它种属基因 组中也有CpG岛,但特征不明显 2)绝大多数CpG岛中很少出现胞嘧啶甲 基化,因此被认为是基因转录活跃区 3)CpG岛主要分布在基因的启动子区和 第一个外显子区 4)绝大多数管家基因( housekeeping gene) 含有CpG岛,是寻找基因的一个指标
CpG岛的一般特点 1) 主要在脊椎动物中发现,其它种属基因 组中也有CpG岛, 但特征不明显. 2) 绝大多数CpG岛中很少出现胞嘧啶甲 基化, 因此被认为是基因转录活跃区. 3) CpG岛主要分布在基因的启动子区和 第一个外显子区. 4) 绝大多数管家基因(housekeeping gene) 含有CpG岛, 是寻找基因的一个指标