练习题: 从某一生物的基因组BamH文库中获得了长 30kb的片断,如用 ECORI消化该片断获得1.7kb、 0.9kb和0.4kb三种片断;如用HindⅢ消化获得16kb 和1.4kb片断;如用上述两酶混合消化获得1.2kb、 09kb、0.5kb合04kb四种片断。根据上述结果绘制 限制性图谱。要求标出 ECORI、HindⅢ和 BamhI的 位点和它们间的距离
练习题： 从某一生物的基因组Bam HI文库中获得了长 3.0kb的片断,如用EcoRI消化该片断获得1.7kb、 0.9kb和0.4kb三种片断;如用Hind Ⅲ消化获得1.6kb 和1.4kb片断;如用上述两酶混合消化获得1.2kb、 0.9kb、0.5kb合0.4kb四种片断。根据上述结果绘制 限制性图谱。要求标出EcoRI、HindⅢ和BamHI的 位点和它们间的距离
第三节重组DNA 在细菌细胞中选择性地扩增特定 DNA片段的过程称分子克隆 (molecular cloning)
第三节 重组DNA • 在细菌细胞中选择性地扩增特定 DNA 片 段 的 过 程 称 分 子 克 隆 （molecular cloning）
重组DNA技术的基本步骤 1)获得目的基因,一般是有重要生物学功能的外源基因 (2)在限制性内切酶和连接酶的作用下,将目的基因与克隆 载体相连接,组成一个新的重组DNA分子( recombinant DNa (3)将重组DNA分子引入受体细胞,并在细胞中进行DNA 复制,最常用的受体细胞为大肠杆菌 (4)对转化子(含有重组分子的受体细胞)进行筛选和鉴定 ,以确认含有外源基因 大量培养细胞可获得目的基因的大量拷贝,或基因表达的产 物等
重组DNA技术的基本步骤 （1）获得目的基因，一般是有重要生物学功能的外源基因。 （2）在限制性内切酶和连接酶的作用下，将目的基因与克隆 载体相连接，组成一个新的重组DNA分子（recombinant DNA （3）将重组DNA分子引入受体细胞，并在细胞中进行DNA 复制，最常用的受体细胞为大肠杆菌。 （4）对转化子（含有重组分子的受体细胞）进行筛选和鉴定 ，以确认含有外源基因。 大量培养细胞可获得目的基因的大量拷贝，或基因表达的产 物等
重组DNA技术的基本步骤 般意义上的重组 DNA技术专指在细菌 外源 ○ 载体 细胞中特异性地扩增 DNA 特定DNA片段的分子 重组Ecoi 克隆技术,广义上的 重组DNA技术还延伸 到整个基因工程的应 。 用领域。 转基因动物转基因植物
一般意义上的重组 DNA技术专指在细菌 细胞中特异性地扩增 特定DNA片段的分子 克隆技术，广义上的 重组DNA技术还延伸 到整个基因工程的应 用领域。 重组DNA技术的基本步骤 外源 DNA 载体 重组E.coli
目的基因的制备 构建重组DNA分子,首先要获得有用的目的基因片段, 最常用的方法有三种 (1)直接从一生物中提取基因组DNA,并构建该基因 组的文库( gene library)再从中调出目的基因的克隆。 (2)以mRNA为模板反转录合成互补的DNA,称CDNA ,并构建cDNA克隆 (3)采用聚合酶链反应(PCR)特异性地扩增某一目的 基因的片段
目的基因的制备 构建重组DNA分子，首先要获得有用的目的基因片段， 最常用的方法有三种： （1）直接从一生物中提取基因组DNA，并构建该基因 组的文库（gene library）再从中调出目的基因的克隆。 （2）以mRNA为模板反转录合成互补的DNA，称cDNA ，并构建cDNA克隆。 （3）采用聚合酶链反应（PCR）特异性地扩增某一目的 基因的片段