●紫外分光光度计测定D№A溶液的纯度和浓度 DNA溶液 蛋白质溶液2 DNA提取液 波长/nm 波长/nm DNA的浓度(mg/L)=A260×50 DNA的纯度=A0/A20≥1.8
⚫ 紫外分光光度计测定DNA溶液的纯度和浓度
●基因文库的构建 将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬 菌体载体上,便构成了该生物的基因文库。 嚣亳當
⚫ 基因文库的构建 将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬 菌体载体上，便构成了该生物的基因文库
反转录人工合成互补DNA 构建基因文库获取目的 基因存在的问题 DNA转录为RNA 费时费萝 RNA内含子的去除 内含子序列 ↓RNA为模板逆转录为DNA >反转录人工合成互补 DNA方法的优势 逆转录完成 获取的DNA片段往往是具有 特定功能的目的基因 以DNA为模板合成双链DNA 形成不含内含子的双链DNA
反转录人工合成互补DNA ➢ 构建基因文库获取目的 基因存在的问题—— 费时费事 内含子序列 ➢ 反转录人工合成互补 DNA方法的优势—— 获取的DNA片段往往是具有 特定功能的目的基因
聚合酶链式反应(PCR) ●PCR技术就是在体外中通过酶促反应有选择地大量 扩增(包括分离)一段目的基因的技术。 加入4种物质 (1)作为模板的DNA序列; (2)与被分离的目的基因两条链各自5端序列相互补的 DNA引物(20个左右碱基的短DNA单链); (3) TaqDNA聚合酶; (4)dNTP (dATP, dTTP, dGTPTAdCTP) 9++ DNA模板4种核苷酸 引 DNA聚合酶
聚合酶链式反应（PCR） ⚫ PCR技术就是在体外中通过酶促反应有选择地大量 扩增（包括分离）一段目的基因的技术。 ⚫ 加入4种物质： （1）作为模板的DNA序列； （2）与被分离的目的基因两条链 各自5’端序列相互补的 DNA引物（20个左右碱基的短DNA单链）； （3）TaqDNA聚合酶； （4）dNTP（dATP, dTTP, dGTP和dCTP）