3)质粒DNA的提取 质粒主要发现于细菌、放孩菌和真菌等细胞中，为飘链、闭环 的DNA分子。它具有自主复制和转最能力，能在子代细脆中保 特恒定的拷贝数，异表达所港带的遗传信息。主要用子构建基 因克隆载体，也可作为分高目的基因和基因表达稠控因子的材 料。 8 DNA 名动子 蔬人梯因 大肠杆苦狂胞 质拉 表达截体 终止子 抗苗素抗性基因 复制原点 控制质粒DHA 抗生京抗性基因 转移的基因 大肠杆葡质粒的分子结构示意图
3) 质粒DNA的提取 质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌等细胞中，为双链、闭环 的DNA分子。它具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保 持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。主要用于构建基 因克隆载体，也可作为分离目的基因和基因表达调控因子的材 料
3)质粒DNA的提取 1.碱裂解法提取质粒DNA 原理：染色体DNA在碱性条件下裂解成孩状DNA发生并 发生变性，质粒DNA雅特环状。在高酸中和至中性条件下， 质粒DNA恢复天然构象，变性的染色体DNA会形成沉淀，从 而将质粒DNA与染色体DNA分开. 变性和裂解 溶液I(aO 尾 沉淀 质粒与染色体 \aOH+SDS破碎细胞 和其它杂质分离 (溶液II) )
3) 质粒DNA的提取 1. 碱裂解法提取质粒DNA 原理： 染色体DNA在碱性条件下裂解成线状DNA发生并 发生变性，质粒DNA维持环状。在高酸中和至中性条件下， 质粒DNA恢复天然构象，变性的染色体DNA会形成沉淀，从 而将质粒DNA与染色体DNA分开
3)质粒DNA的提取 2.高心拉型质粒DNA提取试剂盒 原理：改进的SDS-碱裂解法裂解细 结念凭 洗 胞，高心吸附拉阳硅基质膜在高盐、低 ③Solar心9京家常宝技m公可 4移 H值状态下运#性地结合陪液中的质粒 DNA,再通过漂洗液将杂质和其他细菌 成分去除，最后用低盐、高H值得洗脱 缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗 How to purify molecular grade plasmid DNA 脱。 Thermo Scientifict GeneJETIM Plasmid Miniprep Kit Plasmid DNA extraction 合。R
3) 质粒DNA的提取 2. 离心柱型质粒DNA提取试剂盒 原理：改进的SDS-碱裂解法裂解细 胞，离心吸附柱内硅基质膜在高盐、低 pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒 DNA，再通过漂洗液将杂质和其他细菌 成分去除，最后用低盐、高pH值得洗脱 缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗 脱
3)质粒DNA的提取 3.琼脂糖喉股电泳检测 质粒的三种带型： 1M23 1.共价闭合环状DNA分子：质粒 DNA以负超螺旋构型存在，说动速意 最快： 2.迷开环质粒DNA分子：一条链断 裂，松他的环状分子，泳动速意最慢： 3.孩性DNA分子：质粒的两条能灼 断裂，次动速度居中
3) 质粒DNA的提取 3. 琼脂糖凝胶电泳检测 质粒的三种带型： 1.共价闭合环状DNA分子：质粒 DNA以负超螺旋构型存在，泳动速度 最快； 2.半开环质粒DNA分子：一条链断 裂，松弛的环状分子，泳动速度最慢； 3.线性DNA分子：质粒的两条链均 断裂，泳动速度居中
3)质粒DNA的提取 troubleshooting 1.RNA残留 -RNase A失敌或量不够 2.质粒断裂 一裂解时风过长，动作过子剧到 2. 3.量少 一成胶问题 -葡依量太少或省林老化 -首体重悬不初底 -裂解不完全 3. ~乎灌型质粒
3) 质粒DNA的提取 troubleshooting 1.RNA残留 -RNase A 失效或量不够 2.质粒断裂 -裂解时间过长，动作过于剧烈 3.量少 -凝胶问题 -菌体量太少或菌株老化 -菌体重悬不彻底 -裂解不完全 -严谨型质粒 1. 2. 3