2)基因组DNA的提取 2。甲酰胺解聚法:破碎细隐同上,贴后用高浓震甲酰腰解聚委白质多DN的转合, 再透新获得DNA。减少了防多次袖提的步骤。造用于从标牵中制各高分子量的DNA样品一 可得200kb左右的DNA。 名浓煮甲酰触:製解蛋白质写DNA的复合物,可以使蛋白质变性。 了。玻编棒痘绕法:用盐破脑製解细脆,将裂解物辅于乙惑上,然后用带钩 或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。目标DNA大小约为8OKb。 4.表面活性剂快速制备佐: 用Triton X-100或NP-40表面法性剂就碎细隐,用蛋白膝K或酚去除蛋白,乙 醇沉淀或透析
2) 基因组DNA的提取 2. 甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合, 再透析获得DNA。减少了酚多次抽提的步骤。适用于从标本中制备高分子量的DNA样品— 可得200kb左右的DNA。 高浓度甲酰胺:裂解蛋白质与DNA的复合物,可以使蛋白质变性。 3. 玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩 或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。目标DNA 大小约为80kb。 4. 表面活性剂快速制备法: 用Triton X-100或NP-40表面活性剂破碎细胞,用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙 醇沉淀或透析
2)基因组DNA的提取 DNA浓度与纯度 >浓意的测定 分光光意计、Thermo NanoDrop 回a >纯意的评定 0D260/0D280的值约为1.7-1.9 Thermo 若小于1.7可能有蛋白及苯酚污染: NsNeR 若大于2.0,说明有RNA污或者DNA已整降解: 0D260/0D230>2.0 DNA的储存 喀于Ph8.0的TE(Tris和EDTA)接冲浪中,4°C或-20°C保存, 长期保存样品中可加入一滴氟伤
2) 基因组DNA的提取 DNA浓度与纯度 浓度的测定 分光光度计、Thermo NanoDrop 纯度的评定 OD260/OD280的值约为1.7-1.9 若小于1.7可能有蛋白及苯酚污染; 若大于2.0,说明有RNA污染或者DNA已经降解; OD260/OD230 >2.0 DNA的储存 溶于Ph8.0的TE(Tris和EDTA)缓冲液中,4 ° C或-20°C保存; 长期保存样品中可加入一滴氯仿
2)基因DNA的提取 Troubleshooting: DNA中会有蛋白、多糖、多酚美物质 ·抽提苑化、高盐洗涤 > DNA在溶解前,有酒精残留,酒精抑制后续反定 重新沉淀 > DNA中我留有金属高子 重新70%乙醇漂洗
2) 基因组DNA的提取 Troubleshooting: DNA中含有蛋白、多糖、多酚类物质 - 抽提纯化、高盐洗涤 DNA在溶解前,有酒精残留,酒精抑制后续反应 -重新沉淀 DNA中残留有金属离子 -重新70%乙醇漂洗
2)基因组DNA的提取 Troubleshooting: DNA降解 >材料不新鲜或反复减融 >未很好抑制阳源核酸酶的活性 >提取过程操作过于剧烈,DNA被机械打断 >外源後酸醉污染
2) 基因组DNA的提取 Troubleshooting: DNA降解 材料不新鲜或反复冻融 未很好抑制内源核酸酶的活性 提取过程操作过于剧烈,DNA被机械打断 外源核酸酶污染
2)基因组DNA的提取 Troubleshooting: DNA提取量少 >实验材料不佳或量少 -运取新鲜材料 >裂解不充分 -充分研詹、延长裂解时间 >沉淀不完金 -徐温、延长沉淀时间 >洗涤使得丢失DNA
2) 基因组DNA的提取 Troubleshooting: DNA提取量少 实验材料不佳或量少 -选取新鲜材料 裂解不充分 -充分研磨、延长裂解时间 沉淀不完全 -低温、延长沉淀时间 洗涤使得丢失DNA