4)真核细脆总RNA提取 ※总RNA提取一样牵准备 口植物/动物组织样本： 新蜂取材或组织高体后液氯速源，存于液氮或80℃。 为避兔反复冻融，需小修分装(50八100mg/怜)。 口细脆样牵： 新鲜收集特用或加入TRIz0后-80℃冻唇细脆沉淀。 口血液样本： 新鲜血液分高出淋巴细脆，特用或加入TRIz0l后-80℃ 源存细脆沉淀
4)真核细胞总RNA提取 ※总RNA提取——样本准备 植物/动物组织样本： 新鲜取材或组织离体后液氮速冻，存于液氮或-80℃。 为避免反复冻融，需小份分装（50~100 mg/份）。 细胞样本： 新鲜收集待用或加入TRIzol后 -80℃冻存细胞沉淀。 血液样本： 新鲜血液分离出淋巴细胞，待用或加入TRIzol后 -80℃ 冻存细胞沉淀
4)真核细胞总RNA提取 ※异碗兼酸脑/苯酚法(TRIzol法) 原理：破碎和喀解细脆时能保特RNA的完整性，裂解细隐异粹放出RNA, 酸性条件使RNA和DNA分高，加入氯伤后高心，样品分成水样层和有机 层。RNA蒋在于水样层中，收集后通过异丙醇沉淀下来。 细胞 纯化 一水相 RNA Abnova 离 细胞选择 基因组DNA RNA Extraction by TRIzolR ↓ 加入裂解液 有机相 (TRNzol-A+) ◆贴壁细胞 ◆悬浮细胞 RNA Extraction by TRlzol Contnbuted by Dr.Fion Chen from NHRI pH5.7 0d 9D第
4)真核细胞总RNA提取 ※异硫氰酸胍/苯酚法（TRIzol法） 原理： 破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，裂解细胞并释放出RNA， 酸性条件使RNA和DNA分离，加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机 层。RNA存在于水样层中，收集后通过异丙醇沉淀下来
4)真核细脆总RNA提取 ※提取RNA的灌意事须： RNA张常客易降解辮/I RNase是导数RNA降解的景童要物质I RNase的童要来源： 样品 RNase旅常稳定，它在一些般 试剂 端的条件下可暂时失洁，但限 制因素去除后又逼速复性。用 多次使用的器具 常视的高温高压蒸汽灭首的方 裸常的手 法和蛋白抑制剂都不能使 要沫 RNase完金失活。 > 空气
4)真核细胞总RNA提取 ※提取RNA的注意事项： RNA非常容易降解！！ RNase是导致RNA降解的最主要物质！ RNase的主要来源： 样品 试剂 多次使用的器具 裸露的手 唾沫 空气 RNase非常稳定，它在一些极 端的条件下可暂时失活，但限 制因素去除后又迅速复性。用 常规的高温高压蒸汽灭菌的方 法 和 蛋 白 抑 制 剂 都 不 能 使 RNase完全失活
4)真核细胞总RNA提取 ※何预防RNase污集7 玻痛器通处理： 量筒、试剂瓶等玻璃器鱼须200°C烘烤2小时以上 塑料器里处埋： 0.1%DEPC水喀液浸袍过夜，氣高温高压黄 试剂处理： 氟伤、异丙醇、元水乙醇新开启后RNA专用。0.16DEPC水制备 75%的酒精 专用的RNA裉作间、专用的器械、RNase free的耗材 禄作时戴一次性口罩、手套、帽子、实验服 滋意：DEPC有刺激性，潜在的数瘙物质
4)真核细胞总RNA提取 ※如何预防RNase污染？ 玻璃器皿处理： 量筒、试剂瓶等玻璃器皿须200°C烘烤2小时以上 塑料器皿处理： 0.1%DEPC水溶液浸泡过夜，再高温高压灭菌 试剂处理： 氯仿、异丙醇、无水乙醇新开启 后RNA专用。0.1%DEPC水制备 75%的酒精 专用的RNA操作间、专用的器械、RNase free的耗材 操作时戴一次性口罩、手套、帽子、实验服 注意：DEPC有刺激性，潜在的致癌物质
4)真核细脆总RNA提取 ※检测 由子动物细隐中70-80%的RNA为rRNA, 后者又由28S(约4800nt),18S(约 1900nt)和5.8S(约120nt)三种组成， 所以电泳后寇孩在UV下看见三条清晰的 28s rRNA带。 18s 由于核酸农意写结合EB的款量成正比，所 队28 S rRNA条带的荧光赣意-般比18S 5s rRNA条带的荧光服意藏1.5-2.3倍。品果 这两条rRNA带不清晰或比例小于此范圆则 相彪意RNA 表示RNA有降解（因苟大的RNA被醉降解 的可能更大)
4)真核细胞总RNA提取 ※检测 细胞总RNA 由于动物细胞中70-80% 的RNA为rRNA， 后者又由28S（约4800 nt），18S（约 1900 nt）和5.8S（约120 nt）三种组成， 所以电泳后应该在UV下看见三条清晰的 rRNA带。 由于核酸长度与结合EB的数量成正比，所 以28S rRNA条带的荧光强度一般比18S rRNA条带的荧光强度强1.5-2.3倍。如果 这两条rRNA带不清晰或比例小于此范围则 表示RNA有降解（因为大的RNA被酶降解 的可能更大）