1)核酸的简介 ※核酸是由核普酸或者脱氧核苷酸通过3',5'-裤酸二酯健道接而成的一美鲨 物大分子。包括核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)两美。 贼基 0(s)0(S)0(S) ※ DNA主要储存遗传信息,提取DNA CH2-0-P0P 0 0 0 (y)(3)(a) 童要是对基因和基因组进行分折 HH(OH) ※RNA孟要传递遗传信息,提取RNA 盖要是为了对基因表达进行分折
1)核酸的简介 ※ 核酸是由核苷酸或者脱氧核苷酸通过3 ’ ,5 ’-磷酸二酯键连接而成的一类生 物大分子。包括核糖核酸(RNA) 和脱氧核糖核酸(DNA)两类。 ※ DNA主要储存遗传信息,提取DNA 主要是对基因和基因组进行分析 ※ RNA主要传递遗传信息,提取RNA 主要是为了对基因表达进行分析
2)基因组DNA的提取 ▣样品准备 。常见的标本:血浪、尿浸、嗓浪、 组钨、培养细脆、细雷等。 ·生物组积:景好斯鲜组积,苦不能 马上提取,寇贮存-70℃或液氮 中
2) 基因组DNA的提取 样品准备 • 常见的标本:血液、尿液、唾液、 组织、培养细胞、细菌等。 • 生物组织:最好新鲜组织,若不能 马上提取,应贮存-70℃或液氮 中
2)基因组DNA的提取 ▣核酸的韩放一破裂细胞,韩放核酸。 ·高速碎机捣碎 玻痛为浆器为浆 ”趋声波处理法 化学处理法(SDS、LDS,吐温80等) ·生化法(喀首酶、纤雅素酶等)
2) 基因组DNA的提取 核酸的释放--破裂细胞,释放核酸。 • 高速组织捣碎机捣碎 • 玻璃匀浆器匀浆 • 超声波处理法 • 液氮研磨法 • 化学处理法(SDS、LDS,吐温80等) • 生化法(溶菌酶、纤维素酶等)
2)基因组DNA的提取 ▣核酸的分离 在会有核酸的复杂复合物中,将核酸与其他物质分高:包括非核酸的大 子污梁物(蛋白质、多糖和脂美分子)、旅目的核酸分子、试剂号。 口核酸的浓缩、沉淀与洗涤 >加入一定的盐美(醋破絢、氯化轴等)后使用有机喀剂(品乙醇、异丙 醇等) >少数盐美可使用70-75%的乙醇洗涤 ▣DNA样品的纯化 透析、层折、电凉及运兼性沉淀的纯化方法
2) 基因组DNA的提取 核酸的分离 在含有核酸的复杂复合物中,将核酸与其他物质分离:包括非核酸的大分 子污染物(蛋白质、多糖和脂类分子)、非目的核酸分子、试剂等。 核酸的浓缩、沉淀与洗涤 加入一定的盐类(醋酸钠、氯化钠等)后使用有机溶剂(如乙醇、异丙 醇等) 少数盐类可使用70-75%的乙醇洗涤 DNA样品的纯化 透析、层析、电泳及选择性沉淀的纯化方法
2)基因狼DNA的提取 根据不同的需求运并不同的DNA提取方店: 1.酚抽提法:EDTA、SDS、蛋白醉K破碎细脆,消化蛋白, 然后酚-氟伤袖提DNA,最后乙醇或异丙醇进行沉淀。获 DNA大小为100-150kb。 试剂作用: SDS是一种阴高子去垢剂,在高温(55-65°C)条件下能裂解细胞,使染 色体离析,蛋白质变性,荐放此核酸: 蛋白酶K:浦化DNA膝和细胞中的蛋白质。 Tis-Hcl(Ph8.O):使抽提的DNA进入水相,减少在蛋白层莆留 EDTA:套合Mg2+或Mn2+高子,抑制DNase活性:
2) 基因组DNA的提取 根据不同的需求选择不同的DNA提取方法: 1. 酚抽提法:EDTA、 SDS 、蛋白酶K破碎细胞,消化蛋白, 然后酚-氯仿抽提DNA,最后乙醇或异丙醇进行沉淀。获 DNA大小为100-150kb。 试剂作用: SDS是一种阴离子去垢剂,在高温(55-65°C)条件下能裂解细胞,使染 色体离析,蛋白质变性,释放出核酸; 蛋白酶K:消化DNA酶和细胞中的蛋白质。 Tris-Hcl(Ph8.0):使抽提的DNA进入水相,减少在蛋白层滞留 EDTA:螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性;