4、色谱分离条件选择及定性定量分析 41色谱分离条件选择 减小柱内展宽,提高柱效 (1)固定相:①粒度小,均匀,以减小涡流扩散和流 动相传质阻力;②改进结构,采用大孔径和浅孔道的 表面多孔型载体或全多孔微粒型载体,减少滞留流动 相传质阻力。 (2)流动相:选用低粘度的流动相,有利于增大组分 在溶剂中的扩散系数Dm,减少传质阻力。 (3)流速:从HU曲线可知,HPLC的最佳流速在流 速很小处,减少流速有利于提高柱效,但为加快分析 速度,常采用比最佳流速高数倍的流速。 (4)柱温:提高柱温,可降低流动相粘度,减少传质 阻力,但柱温升高将使分辨率降低,柱寿命短,易产 生气泡,一般在室温下进行
4、色谱分离条件选择及定性定量分析 4.1 色谱分离条件选择 • 减小柱内展宽，提高柱效 （1）固定相：①粒度小，均匀，以减小涡流扩散和流 动相传质阻力；②改进结构，采用大孔径和浅孔道的 表面多孔型载体或全多孔微粒型载体，减少滞留流动 相传质阻力。 （2）流动相：选用低粘度的流动相，有利于增大组分 在溶剂中的扩散系数Dm，减少传质阻力。 （3）流速：从H-U曲线可知，HPLC的最佳流速在流 速很小处，减少流速有利于提高柱效，但为加快分析 速度，常采用比最佳流速高数倍的流速。 （4）柱温：提高柱温，可降低流动相粘度，减少传质 阻力，但柱温升高将使分辨率降低，柱寿命短，易产 生气泡，一般在室温下进行
4、色谱分离条件选择及定性定量分析 柱外展宽(又称“柱外效应”) 指从进样点到检测池之间除柱子本身以外的所有死 体积所引起的色谱峰展宽,柱效下降。可分为: (1)柱前展宽:主要由进样引起,减小进样器的死体 积,用阀门进样可减少柱前谱带展宽,提高柱效。 (2)柱后展宽:主要由接管、检测器流通池体积及检 测器响应时间等因素所引起。因此,用短而内径细的 接管,减少流通池体积,改进检测器和记录系统的响 应速度等都是克服柱后展宽的途径 4.2定性定量分析 归一化法、外标法和内标法等
4、色谱分离条件选择及定性定量分析 • 柱外展宽(又称“柱外效应”) 指从进样点到检测池之间除柱子本身以外的所有死 体积所引起的色谱峰展宽，柱效下降。可分为： （1）柱前展宽：主要由进样引起，减小进样器的死体 积，用阀门进样可减少柱前谱带展宽，提高柱效。 （2）柱后展宽：主要由接管、检测器流通池体积及检 测器响应时间等因素所引起。因此，用短而内径细的 接管，减少流通池体积，改进检测器和记录系统的响 应速度等都是克服柱后展宽的途径。 4.2 定性定量分析 归一化法、外标法和内标法等