循环阵列测序一碱基读取 PCR-amplified Raster Position 432 colony with dATP Distal Tag, Base +4 Extended with dCTP G C 4。 Distal Tag, Base +5 Continue cycles G GG T C A G iE: At each sequencing cycle, four-color imaging is performed across several hundred raster positions to determine the sequence of each amplified bead at a specific position in one of the tags The identity of nucleotides used at each extension step are listed along the x-axis. The y-axis depicts the measured signal at each cycle for one sequence both single andmultiple( such as homopolymeric)incorporations can be distinguished from non-incorporation events. The decoded sequence is listed along the top
循环阵列测序—碱基读取
几种不同生物基因组的测序 1)大肠杆菌基因组测序-图位法 2)流感嗜血杆菌基因组测序-鸟枪法 3)果蝇基因组测序—鸟枪法 4)人类基因组测序一图位法和鸟枪法 4)拟南芥基因组测序图位法 5)水稻基因组测序—图位法和鸟枪法
几种不同生物基因组的测序 1) 大肠杆菌基因组测序----图位法 2) 流感嗜血杆菌基因组测序---鸟枪法 3) 果蝇基因组测序---鸟枪法 4) 人类基因组测序---图位法和鸟枪法 4) 拟南芥基因组测序—图位法 5) 水稻基因组测序---图位法和鸟枪法
大肠杆菌基因组测序(1) 1.主要以物理为依据测序 022551 2497926 2690160 1639121 2475719C 2686777 2.各区的测序 A:22kb,λ克隆,然后鸟枪法测序 B:2400kb,在基因組中插入 I-SceI位点,分离 I-SceI片段鸟枪法测序 Meganuclease I-SceI,识别18bp位点:5- TAGGGATAA/ CAGGGTAAT-3’. ISceI 编码基因来自酵母线粒体215rNA基因的内含子, C:2okb,基因组DNA环化克隆 利用同源重组将带有复制起娢点和两个重組酶识别的特异顺序 插入到大肠杄菌染色体的特定序列,中阃相距50-100kb.当诱导时, 细胞表达重组酶和复制蛋白.重组酶切割两个插入顺序,并使中 间DNA环化.环化A作为大质粒扩增,纯化后鸟枪法测序 D:1900kb,λ克隆,鸟枪法测序
大肠杆菌基因组测序（1）
大肠杆菌基因组(C区)测序 大肠杆菌C区测序采取了分割染色体DNA 的技术,将切离的一段染色体DNA与人工插 入的复制载体整合,获得可独立扩增的克隆 片段用于鸟枪法测序
大肠杆菌基因组（C区）测序 大肠杆菌C区测序采取了分割染色体DNA 的技术, 将切离的一段染色体DNA与人工插 入的复制载体整合, 获得可独立扩增的克隆 片段用于鸟枪法测序
DNA (A) Excision -cis place. Cre LoXP ment of loxP sites in same directional orientation 正向重复,重组切除 loxP sites Cre (8)Inversion-cis place Cre 重 ment of loxP sites in opposite directional orientation 组 反向重复,重组倒位 Cre (C) Translocation-trans 系 placement of loxPsites 反式位置,重组转位 统 LOXP ATAACTTCGTATA GCATACAT TATACGAAGTTAT 13 bp 8 bp 13 bp LoXP是噬菌体P1中发现的一段位点专一性重组DNA序列,可被Cre重组酶识别
LoxP - Cre 重 组 系 统