(二)细胞凋亡的检测方法 1.形态学观察一染色法 -台盼蓝;DAPI;吉姆萨染色法等 B DAPI染色显示凋亡细胞的染色质凝集 A.正常细胞核B.凋亡细胞核
(二)细胞凋亡的检测方法 1. 形态学观察——染色法 – 台盼蓝;DAPI;吉姆萨染色法等 DAPI 染色显示凋亡细胞的染色质凝集 A. 正常细胞核 B. 凋亡细胞核
(二) 细胞凋亡的检测方法 2.DNA电泳 一凋亡时,细胞内特异性核酸 湖亡特异 核酸酶在 核小体随 内切酶活化,染色质DNA在 机切割 核小体间被特异性切割, DNA降解成180~200bp 或其整数倍片段 细胞凋亡的典型特征—一DNA 梯状条带(DNA ladders)
(二)细胞凋亡的检测方法 2. DNA电泳 – 凋亡时,细胞内特异性核酸 内切酶活化,染色质DNA 在 核小体间被特异性切割, DNA 降解成 180~200 bp 或其整数倍片段 细胞凋亡的典型特征——DNA 梯状条带(DNA ladders)
(二)细胞凋亡的检测方法 3.DNA断裂的原位末端标记法 -转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUEL) 一脱氧核糖核苷酸末端转移酶(不需要模板!) -能对DNA分子断裂缺口中的3'-OH进行原位标记(正 常或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂)。 -凋亡细胞的核DNA断裂后产生3'-OH末端,因此可借 助荧光染料对单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染 色,荧光显微镜镜检
(二)细胞凋亡的检测方法 3. DNA 断裂的原位末端标记法 – 转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定法(TUNEL) – 脱氧核糖核苷酸末端转移酶(不需要模板!) – 能对DNA 分子 断裂缺口中的3′-OH 进行原位标记(正 常或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂)。 – 凋亡细胞的核DNA 断裂后产 生3′-OH 末端,因此可借 助荧 光染料对单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染 色,荧光显微镜镜检
(二) 细胞凋亡的检测方法 3.DNA断裂的原位末端标记法 DNA Fragmentation-TUNEL Roche Labeling Principle sonsouBei( In situ nick translation In situ end labeling (TUNEL) (template dependent) (template independent) nick 3 3 5 5 +Terminal polymerase Terminal transferase +X-dWTP(回 +X-dNTP (
(二)细胞凋亡的检测方法 3. DNA 断裂的原位末端标记法
(二)细胞凋亡的检测方法 3.DNA断裂的原位末端标记法 Con 16s 248a16s 原位末端标记法显示斑马鱼胚胎发育过程中的细胞凋亡
(二)细胞凋亡的检测方法 3. DNA 断裂的原位末端标记法 原位末端标记法显示斑马鱼胚胎发育过程中的细胞凋亡