(1)IGSF和IGSF相互识别,如Fc受体识别 Igg Fc段 (2)IGSF和结合素( Integrin)相互识别,如ICAM-2与IFA-1。 (3)IGSF和其它分子的相互识别,如:TCR识别MHCI类或Ⅱ类分子与 Ag复合物。 第六节抗体的制备 既人工制备抗体,根据制备的原理和方法分为多克隆抗体,单克隆抗体和基 因工程抗体三类。 多克隆Ab( polyclonal Ab) 由于抗原性物质具有多种抗原决定簇,使可制激多种淋巴细胞克隆,产生抗 多种抗原决定族的Ab,所以体液或血清中是含多种抗体的混合物。把这样获得 的免疫血清称为多克隆抗体。也是第一代抗体。 由于多克隆抗体不均一,所以在对其研究和应用,均受到很大限制。 二、单克隆抗体( Monoclonal ab,MAb) 如能将所需的抗体形成细胞选出并能在体外进行培养即可获得已知特异的 单克隆Ab 1975年德国的 Kohler和英国的 milstein发现了此技术 小鼠骨髓瘤细胞 SPBC免疫的小鼠腺细胞 融合 杂交瘤 Hybridoma 该杂交瘤细胞既能大量无限繁殖,又能产生Ab,故称为单克隆Ab。 用杂交瘤技术制备的抗体可视为第二代抗体。 其特点:纯度高,特异性强。 应用:1、用于检测各种Ag,提高检测抗原的敏感性及特异性。 2、可制成导向药物( targeting drug),与核系各种毒素或药物结合, 是一种新型的免疫治疗方法。 3、用于研究,如对免疫细胞的分离鉴定以及研究各种细胞膜表面分 子的结构与功能都具有重要意义 三、基因工程抗体( Gene engineening ab, Geneticall! engineerins aB) 兴起于80年代早期。这一技术是在已知了Ig的结构及功能之后与重组DNA 技术相结合,根据研究者的意图在基因水平上对Ig分子进行切割,拼接或修饰
21 （1）IGSF 和 IGSF 相互识别，如 Fc 受体识别 IgG Fc 段。 （2）IGSF 和结合素（integrin）相互识别，如 ICAM—2 与 IFA—1。 （3）IGSF 和其它分子的相互识别，如：TCR 识别 MHCⅠ类或Ⅱ类分子与 Ag 复合物。 第六节 抗体的制备 既人工制备抗体，根据制备的原理和方法分为多克隆抗体，单克隆抗体和基 因工程抗体三类。 一、多克隆 Ab（polyceonal Ab） 由于抗原性物质具有多种抗原决定簇，使可制激多种淋巴细胞克隆，产生抗 多种抗原决定族的 Ab，所以体液或血清中是含多种抗体的混合物。把这样获得 的免疫血清称为多克隆抗体。也是第一代抗体。 由于多克隆抗体不均一，所以在对其研究和应用，均受到很大限制。 二、单克隆抗体（Monoclrnal Ab,M,Ab） 如能将所需的抗体形成细胞选出并能在体外进行培养即可获得已知特异的 单克隆 Ab。 1975 年德国的 Kohler 和英国的 milstein 发现了此技术。 小鼠骨髓瘤细胞 SPBC 免疫的小鼠腺细胞 融合 杂交瘤 Hybridoma 该杂交瘤细胞既能大量无限繁殖，又能产生 Ab，故称为单克隆 Ab。 用杂交瘤技术制备的抗体可视为第二代抗体。 其特点：纯度高，特异性强。 应用：1、用于检测各种 Ag，提高检测抗原的敏感性及特异性。 2、可制成导向药物（tapgeting drug），与核系各种毒素或药物结合， 是一种新型的免疫治疗方法。 3、用于研究，如对免疫细胞的分离鉴定以及研究各种细胞膜表面分 子的结构与功能都具有重要意义。 三、基因工程抗体（Gene engineening Ab, Genetically engineerins AB） 兴起于 80 年代早期。这一技术是在已知了 Ig 的结构及功能之后与重组 DNA 技术相结合，根据研究者的意图在基因水平上对 Ig 分子进行切割，拼接或修饰
甚至是人工全合成后导入受体细胞表达,产生新型的也称为第三代Ab 基因工程抗体包括嵌合抗体,重物Ab,单链Ab,单区Ab等 因McAb多数是能源的应用时受到限制,所以基因工程抗体可以制成人源 1、嵌合抗体( chimeric anybody)是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定 区融合而成的抗体。主要是减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。 ①建立鼠源性McAb的杂交瘤,在隆出基因。 ②克隆人抗体的恒定区基因。 ③连接两基因 ④插入载体。 ⑤表达 2、CDQ移植抗体( complementary Determinbig Region Grafied antibodves) COR为互补决定区,是抗体识别抗原的区域,位于可变区顶端,直接介导 抗体与抗原的结合。 将小鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架中,产生的抗体称为COR 移植。 3、FV、SFV和双价SFⅤ( Fragment of vanable region) FV,含有重链和轻链可变区的片段,具有结合抗原的能力。还可以与配体 结合 SFV,( singh chain antibely)用不同的连接物将两个可变区连接一条多肽链。 双价SFV,两个SFV构成的二聚体。 (双特异性抗体)分别具有两种特定性 复习题 复习思考题 简述免疫球蛋白的基本结构及其主要生物学功 能 简述免疫球蛋白分类和分类的依据 3、图示木瓜蛋白酶和胃蛋白酶水解IgG分子产生的酶解片 断,并简述个片段的生物学功能 4、何谓Ig的同种型同种异型和独特型?它们的主要差异是 什么? 5、针对Ig同种异型决定簇(遗传标志)的抗体能否与下列Ig 分子或其功能区起反映? A C、62A D、(u2A2)5
22 甚至是人工全合成后导入受体细胞表达，产生新型的也称为第三代 Ab。 基因工程抗体包括嵌合抗体，重物 Ab，单链 Ab，单区 Ab 等。 因 McAb 多数是能源的应用时受到限制，所以基因工程抗体可以制成人源 的。 1、嵌合抗体（chimeric anubody）是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定 区融合而成的抗体。主要是减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。 ① 建立鼠源性 McAb 的杂交瘤，在隆出基因。 ② 克隆人抗体的恒定区基因。 ③ 连接两基因。 ④ 插入载体。 ⑤ 表达。 2、CDQ 移植抗体（complementary Determinbig Region Grafied antibodves） COR 为互补决定区，是抗体识别抗原的区域，位于可变区顶端，直接介导 抗体与抗原的结合。 将小鼠的 CDR 序列移植到人的抗体可变区框架中，产生的抗体称为 COR 移植。 3、FV、SFV 和双价 SFV（Fragment of vanable region） FV，含有重链和轻链可变区的片段，具有结合抗原的能力。还可以与配体 结合。 SFV，（singhe chain antibely）用不同的连接物将两个可变区连接一条多肽链。 双价 SFV，两个 SFV 构成的二聚体。 （双特异性抗体）分别具有两种特定性 复习题: 复习思考题： 1、简述免疫球蛋白的基本结构及其主要生物学功 能. 2、简述免疫球蛋白分类和分类的依据 3、图示木瓜蛋白酶和胃蛋白酶水解 IgG 分子产生的酶解片 断,并简述个片段的生物学功能 4、何谓 Ig 的同种型,同种异型和独特型?它们的主要差异是 什么? 5、针对 Ig 同种异型决定簇(遗传标志)的抗体能否与下列 Ig 分子或其功能区起反映? A、 γ2λ2 B、 ε2κ2 C、 δ2λ2 D、 (μ2λ2)5
E、K型L链Ⅴ区 F、λ型L链C区 6、试比较各类Ig的结构及主要生物学特性和功能 、简述免疫球蛋白的生物学活性 何谓克隆抗体(McAb)?简述制备McAb的原理
23 E、 κ型 L 链 V 区 F、 λ型 L 链 C 区 6、试比较各类 Ig 的结构及主要生物学特性和功能 7、简述免疫球蛋白的生物学活性 8、何谓克隆抗体(MCAb)?简述制备 MCAb 的原理
第四章补体(3学时) 1、补体的发现,新鲜免疫血清,体内体外溶筒,称为免疫溶菌现象为60℃ 30分钟灭活 2、与抗原刺激无关 第一节补体的组成 1、三组成分 CR-C ①周有成分,(14分子),②激活调控分子 B,D,P,H,I因子③补体受体。 调节因子 2、表示法C3→C3a+C3C3biC 3、产生细胞肝C u中 肠粘膜上皮细胞 4、理化性质,均为糖蛋白,大多数为β球蛋白,少数为α,γ球蛋白。固 有成分对热不稳定,通常56℃30分被灭活。 第二节补体系统的激活 经典途径( Classical pathway) 激活物质IfG1,IfG2,IfG3,IfG4,分别与行形成复合 1、识别阶段(单位)C1 2、活化阶段(单位)C1,C2,C3。 3、膜攻击阶段(单位)C5-C9。 C5667嵌在胞膜上 激活物, Ab leg1,G3,IgM 二、替代途径(旁路激活途径)( Alternatⅳ ve pathway) 1、正常生理情况下的准备阶段 2、旁路途径的激活 激活物:LPS,肽聚糖,病毒感染细胞,肿瘤细胞等。 3、激活效应的放大 4、两条激活途径的比较。 、补体激活过程的调节
24 第四章 补体（3 学时） 1、补体的发现，新鲜免疫血清，体内体外溶筒，称为免疫溶菌现象为 60℃ 30 分钟灭活。 2、与抗原刺激无关。 第一节 补体的组成 1、三组成分 CR—Cg ①周有成分，（14 分子），②激活调控分子 B，D，P，H，I 因子 ③补体受体。 调节因子 2、表示法 C3→C3a+C3 C3bi C4 3、产生细胞 肝 C μφ 肠粘膜上皮细胞 4、理化性质，均为糖蛋白，大多数为β球蛋白，少数为α，γ球蛋白。固 有成分对热不稳定，通常 56℃30 分被灭活。 第二节 补体系统的激活 一、经典途径（Classical pathway） 激活物质 IfG1，IfG2，IfG3，IfG4，分别与行形成复合。 1、识别阶段（单位）C1。 2、活化阶段（单位）C1，C2，C3。 3、膜攻击阶段（单位）C5—C9。 C5667 嵌在胞膜上. 激活物，Ab IgG 1，G3，IgM。 二、替代途径（旁路激活途径）（Alternative pathiay） 1、正常生理情况下的准备阶段。 2、旁路途径的激活。 激活物：LPS，肽聚糖，病毒感染细胞，肿瘤细胞等。 3、激活效应的放大。 4、两条激活途径的比较。 三、补体激活过程的调节
(一)体液中可溶性调节分子的作用 1、自行衰变的调节。 Czb, Csb 2、体液中灭活物质的调节 (1)C1,抑制物 可与C1不可逆地结合,使C1失去酯酶活性。 (2)C4结合蛋白(C4 binding protech C4bp)能竞争性地抑制C4b与C2b结合。 (3)I因子,又称C3b灭活因子(C3 binactiuator)裂解C3B→C3 (4)H因子( Factor h) 能竞争性地抑制B因子与C3B的结合,还能使C3B从C3Bb中置换出来。 (5)S蛋白( S protein) 能干扰C15667与的胎膜结合。 (6)Cg结合蛋白。 可阻止C5678中的C8与C9的结合。 3、同种限制因子( homslogous restiction factor HRF) 又称Cg结合蛋白,存在于正常人红细胞,单核细胞淋巴细胞及血小板上, 主要作用是通过对C5b678复合物中C8分子的结合,阻断C9与Cg的结合及C9 分子的聚合,使自身细胞膜上不能形成由C5b6789膜攻击复合867 (二)膜结合性调分子的作用 广泛存在于血细胞和其它组织细胞表面,其主要功能是保护宿主自身组织细 胞免遭补体介导的破坏作用。 1、膜辅因子蛋白( membrane cofoc protacn MCP 是一种穿膜蛋白(CD46),可与一些组织细胞表面粘附的C4C3b结合,主 要作用是协助I因子裂解灭活自身组织细胞表面结合的C4b/C3b,从而抑制C3 转化酶的形成,病原微生物和其它旁路途径激活物表面缺乏MCP,因而粘附在 他们表面的Cab/C3b可保持活化,并易与C2/B因子结合。 2、促衰变因子( decay accelerting factor DAF) 为单链腹蛋白分子(CD55),分布在一些组织细胞上,而病原微生物和某些 补体激活物表面缺乏,DAF能与上述细胞表面粘附的C4/AC3分子结合,可以 看作是C4b/AC3的受体。主要作用:①可竞争性抑制B因子与细胞膜上的C3b 结合,抑制旁路途径C3转化酶(C3BB)在自身细胞膜上形成。②能从C4b2b 和CB复合物中快速解离C2b和Bb,使已形成的C3转化酶迅速自发衰变,从 而阻止膜合物在自身组织细胞膜上形成
25 （一）体液中可溶性调节分子的作用 1、自行衰变的调节。 Czb，Csb 2、体液中灭活物质的调节。 （1）C 1，抑制物 可与 C1 不可逆地结合，使 C1 失去酯酶活性。 （2）C4 结合蛋白（C4binding protech C4bp）能竞争性地抑制 C4b 与 C2b 结合。 （3）I 因子，又称 C 3b 灭活因子（C3binactiuator）裂解 C3B→C3vI。 （4）H 因子（Factor H） 能竞争性地抑制 B 因子与 C3B 的结合，还能使 C3B 从 C3bBb中置换出来。 （5）S 蛋白（S protein） 能干扰 C15667与的胎膜结合。 （6）C8 结合蛋白。 可阻止 C5678 中的 C8与 C9的结合。 3、同种限制因子（homslogous restiction factor,HRF） 又称 Cg 结合蛋白，存在于正常人红细胞，单核细胞淋巴细胞及血小板上， 主要作用是通过对 C5b678复合物中 C8分子的结合，阻断 C 9 与 C8的结合及 C 9 分子的聚合，使自身细胞膜上不能形成由 C 5b6789膜攻击复合 867。 （二）膜结合性调分子的作用 广泛存在于血细胞和其它组织细胞表面，其主要功能是保护宿主自身组织细 胞免遭补体介导的破坏作用。 1、膜辅因子蛋白（membrane cofoc protacn MCP） 是一种穿膜蛋白（CD46），可与一些组织细胞表面粘附的 C 4b/ C 3b 结合,主 要作用是协助 I 因子裂解灭活自身组织细胞表面结合的 C 4b/ C3b，从而抑制 C 3 转化酶的形成，病原微生物和其它旁路途径激活物表面缺乏 MCP，因而粘附在 他们表面的 C ab/ C 3b 可保持活化，并易与 C 2/B 因子结合。 2、促衰变因子（decay accelerting factor.DAF） 为单链腹蛋白分子（CD55），分布在一些组织细胞上，而病原微生物和某些 补体激活物表面缺乏，DAF 能与上述细胞表面粘附的 C 4b/A C 3b 分子结合，可以 看作是 C 4b/A C 3b 的受体。主要作用：①可竞争性抑制 B 因子与细胞膜上的 C 3b 结合，抑制旁路途径 C3 转化酶（C 3bBbB）在自身细胞膜上形成。②能从 C 4b2b 和 C 3bBb 复合物中快速解离 C 2b 和 Bb，使已形成的 C 3 转化酶迅速自发衰变，从 而阻止膜合物在自身组织细胞膜上形成