实验须知 实验课的目的要求 免疫学实验课的目的是加强和巩固对课堂讲授的基本理论的理解和体 会,学习和掌握免疫学实验的基本操作技术。为今后的实际工作和科研工 作打下基础。为上好免疫学实验课,要求同学做到如下各点: 1.课前务必做好充分预习,明确实验目的、原理、方法及操作中的 注意事项,做到心中有数。 2.在实验进程中,严格按照实验指导所列步骤和要求进行操作,坚 持实验的严肃性、严格性、严密性 3.真实记录实验结果,对错误的结果要认真分析,找出原因,得出 结论。实验完成后,写出实验报告及时交给老师批改。 4.严格遵守实验室规则,防止各种事故发生。 实验室规则 免疫学实验材料,有些是病原微生物,在实验中稍一不慎和防护上的 不善,便有发生人身感染的可能。所以要求同学认真遵守下列各点: 1.进入实验室先把个人书包放到指定地点,穿好白大衣,实验台上 只放实验指导、记录本和文具 2.实验室内必须肃静、整洁,不得高声谈笑和随便走动。 3.禁止吸烟、饮食,不能用手抚摩头面,以防感染。 4.实验中如发生割破皮肤及实验材料破损事故,应立即报告教师 进行紧急处理。皮肤破伤可用2%红汞或2%碘酒消毒。污染桌面、地面和 物品可用3%来苏儿来消毒 5.用过的有菌器材和培养物放于指定地点,经过菌液的吸管放在装
1 实 验 须 知 一．实验课的目的要求 免疫学实验课的目的是加强和巩固对课堂讲授的基本理论的理解和体 会，学习和掌握免疫学实验的基本操作技术。为今后的实际工作和科研工 作打下基础。为上好免疫学实验课，要求同学做到如下各点： 1. 课前务必做好充分预习，明确实验目的、原理、方法及操作中的 注意事项，做到心中有数。 2. 在实验进程中，严格按照实验指导所列步骤和要求进行操作，坚 持实验的严肃性、严格性、严密性。 3. 真实记录实验结果，对错误的结果要认真分析，找出原因，得出 结论。实验完成后，写出实验报告及时交给老师批改。 4. 严格遵守实验室规则，防止各种事故发生。 二．实验室规则 免疫学实验材料，有些是病原微生物，在实验中稍一不慎和防护上的 不善，便有发生人身感染的可能。所以要求同学认真遵守下列各点： 1. 进入实验室先把个人书包放到指定地点，穿好白大衣，实验台上 只放实验指导、记录本和文具。 2. 实验室内必须肃静、整洁，不得高声谈笑和随便走动。 3. 禁止吸烟、饮食，不能用手抚摩头面，以防感染。 4. 实验中如发生割破皮肤及实验材料破损事故，应立即报告教师， 进行紧急处理。皮肤破伤可用 2%红汞或 2%碘酒消毒。污染桌面、地面和 物品可用 3%来苏儿来消毒。 5. 用过的有菌器材和培养物放于指定地点，经过菌液的吸管放在装
有消毒液的桶内,用过的载片,用后立即放到消毒缸内,不得弃置桌上。 6.注意节约实验药品,爱护实验器材,如有损失和破损,立即报告 教师,等候处理。 7.易燃物品(酒精、二甲苯等)不准接近火源,如遇火险,先关掉 电源,再用湿布和沙土覆盖灭火 8.实验结束。将实验台收拾整齐,擦净桌面,然后脱下白大衣反叠 好放入衣柜内,再洗手消毒后离去。 9.值日生扫好室内卫生,并检查水电、煤气等开关是否关好,防止 发生安全事故
2 有消毒液的桶内，用过的载片，用后立即放到消毒缸内，不得弃置桌上。 6. 注意节约实验药品，爱护实验器材，如有损失和破损，立即报告 教师，等候处理。 7. 易燃物品（酒精、二甲苯等）不准接近火源，如遇火险，先关掉 电源，再用湿布和沙土覆盖灭火。 8. 实验结束。将实验台收拾整齐，擦净桌面，然后脱下白大衣反叠 好放入衣柜内，再洗手消毒后离去。 9. 值日生扫好室内卫生，并检查水电、煤气等开关是否关好，防止 发生安全事故
必选实验 实验一与免疫相关的细胞形态的观察 目的要求 观察与免疫相关的几种细胞的形态,了解它们在机体免疫反应中的作 用 实验器材 显微镜 血液涂片(瑞氏染色) 结缔组织切片 方法: 油镜观察 血涂片的观察 (A)红细胞:淡红色,无核的圆形细胞,因红血球为双凹形,故边 缘部分染色较深,中心较浅,直径7-8微米 (B)颗粒白血球 嗜中性颗粒白血球:体积略大于红细胞,细胞核被染成紫色分叶状, 可分1—-5叶,核叶之间联以染色质细丝,染色质染成粉色,其中充满细小 的大小均匀的颗粒被染成紫红色。直径1012微米 嗜酸性颗粒白血球:略大于嗜中白血球,细胞核染成紫色,通常为2 叶,胞质充满嗜酸性大圆颗粒,被染成鲜红色。直径10-15微米。 嗜碱性颗粒白血球:体积略小于嗜酸性白血球,细胞质中有大小不等 被染成紫色颗粒,颗粒数目较嗜酸性白血球的颗粒少,核为1-2叶染成淡 兰色。直径10-11微米。 (C)无颗粒白血球
3 必选实验 实验一 与免疫相关的细胞形态的观察 目的要求： 观察与免疫相关的几种细胞的形态，了解它们在机体免疫反应中的作 用。 实验器材： 显微镜 血液涂片（瑞氏染色） 结缔组织切片 方法： 油镜观察 一．血涂片的观察 （A） 红细胞：淡红色，无核的圆形细胞，因红血球为双凹形，故边 缘部分染色较深，中心较浅，直径 7—8 微米。 （B） 颗粒白血球 嗜中性颗粒白血球：体积略大于红细胞，细胞核被染成紫色分叶状， 可分 1—5 叶，核叶之间联以染色质细丝，染色质染成粉色，其中充满细小 的大小均匀的颗粒被染成紫红色。直径 10—12 微米。 嗜酸性颗粒白血球：略大于嗜中白血球，细胞核染成紫色，通常为 2 叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染成鲜红色。直径 10—15 微米。 嗜碱性颗粒白血球：体积略小于嗜酸性白血球，细胞质中有大小不等 被染成紫色颗粒，颗粒数目较嗜酸性白血球的颗粒少，核为 1—2 叶染成淡 兰色。直径 10—11 微米。 （C） 无颗粒白血球
淋巴细胞:涂片中可观察到中、小型两种。小淋巴细胞与红血球大小 相似,圆形。其中含致密的核,染成深紫色。周围仅有一薄层嗜硷性染成 淡蓝的细胞质。中淋巴细胞较大,有较宽层的细胞,核圆形。6-8微米。 单核细胞:体积最大,细胞圆形。胞质染成灰蓝色。核呈肾形或马蹄 形,染色略浅于淋巴细胞的核。直径14-20微米。 二.肥大细胞的观察(示教) 胞体较大,呈卵圆形,胞质内充满粗大均等的嗜硷性颗粒。其中含肝 素、组织胺等物质。常成群地分布于血管的周围 三.浆细胞的观察(示教) 细胞呈圆形或卵圆形,胞质丰富,呈嗜硷性。核圆形,着色深,多偏 于细胞的一侧,染色质核膜呈车轮分布。正常组织浆细胞少,慢性炎症时 增多。浆细胞合成和分泌抗体,对免疫有重要意义。 四.巨噬细胞:又称组织细胞,细胞形态不规则。常伸出短而钝突起, 有很强的吞噬能力 附 瑞特氏染色 1.染色液配置 称取瑞特氏染料0.1克溶于60m甲醇中,过滤。贮褐色瓶中备用。(配 置时,要先将瑞特氏染料置硏钵体内边硏边滴加甲醇,使染料溶液得更好。) 2.瑞特氏染色法: 取小鼠骨动脉血,涂制玻片。干后用玻璃笔在涂处之两侧划线(限制 染液流掉)。于划线内部滴加染液3-4滴,经3-5分钟后,再滴加等量的蒸 馏水,轻轻晃动混合。经5分钟后,用蒸馏水洗净,待干后用油镜检査
4 淋巴细胞：涂片中可观察到中、小型两种。小淋巴细胞与红血球大小 相似，圆形。其中含致密的核，染成深紫色。周围仅有一薄层嗜硷性染成 淡蓝的细胞质。中淋巴细胞较大，有较宽层的细胞，核圆形。6-8 微米。 单核细胞：体积最大，细胞圆形。胞质染成灰蓝色。核呈肾形或马蹄 形，染色略浅于淋巴细胞的核。直径 14-20 微米。 二．肥大细胞的观察（示教） 胞体较大，呈卵圆形，胞质内充满粗大均等的嗜硷性颗粒。其中含肝 素、组织胺等物质。常成群地分布于血管的周围。 三．浆细胞的观察（示教） 细胞呈圆形或卵圆形，胞质丰富，呈嗜硷性。核圆形，着色深，多偏 于细胞的一侧，染色质核膜呈车轮分布。正常组织浆细胞少，慢性炎症时 增多。浆细胞合成和分泌抗体，对免疫有重要意义。 四．巨噬细胞：又称组织细胞，细胞形态不规则。常伸出短而钝突起， 有很强的吞噬能力。 附： 瑞特氏染色： 1．染色液配置 称取瑞特氏染料 0.1 克溶于 60ml 甲醇中，过滤。贮褐色瓶中备用。（配 置时，要先将瑞特氏染料置研钵体内边研边滴加甲醇，使染料溶液得更好。） 2．瑞特氏染色法： 取小鼠骨动脉血，涂制玻片。干后用玻璃笔在涂处之两侧划线（限制 染液流掉）。于划线内部滴加染液 3-4 滴，经 3-5 分钟后，再滴加等量的蒸 馏水，轻轻晃动混合。经 5 分钟后，用蒸馏水洗净，待干后用油镜检查
实验二沉淀反应 可溶性抗原与相应的抗体混合,在电解质存在的条件下,两者比例适 合,即可有沉淀物出现,叫沉淀反应( Precipitation).由于沉淀反应抗原多 系胶体溶液。沉淀物主要是由抗体蛋白所组成。 为了求得抗原与抗体的适宜比例,保证有足够的抗体,而且抗原分子 小,具有较大的反应面积,因此操作上通常是稀释抗原,不稀释抗体 沉淀反应的种类有环状沉淀、絮状沉淀、荚膜膨胀、琼脂扩散及免疫 电泳等。此外还有放射性同位素标记、酶标记等测定法。 (一)环状沉淀反应 当抗原与相应抗体形成一个接触面时,如二者比例适当,接触面上可 形成一个乳白色的环状物即为阳性沉淀反应。 材料: 1.免疫血清:免疫兔抗人血清 2.抗原:人血清 3.小沉淀管、毛细吸管、橡皮头、生理盐水 方法: 1.取小沉淀管2只,以毛细吸管吸取抗人血清约0.2毫升,加入第 管,加时注意不能有气泡。 2.以毛细吸管吸取生理盐水0.2毫升加入第二管 3.用毛细吸管吸入血稀释θ2毫升加入各管,加时应注意使抗原溶 液缓缓由管壁流下,轻浮于血清面上,使成一明显界面,切勿使之相混。 4.置室温中10-20分钟,观察液面有无乳白色沉淀环,若有则为阳
5 实验二 沉淀反应 可溶性抗原与相应的抗体混合，在电解质存在的条件下，两者比例适 合，即可有沉淀物出现，叫沉淀反应（Precipitation）.由于沉淀反应抗原多 系胶体溶液。沉淀物主要是由抗体蛋白所组成。 为了求得抗原与抗体的适宜比例，保证有足够的抗体，而且抗原分子 小，具有较大的反应面积，因此操作上通常是稀释抗原，不稀释抗体。 沉淀反应的种类有环状沉淀、絮状沉淀、荚膜膨胀、琼脂扩散及免疫 电泳等。此外还有放射性同位素标记、酶标记等测定法。 （一）环状沉淀反应 当抗原与相应抗体形成一个接触面时，如二者比例适当，接触面上可 形成一个乳白色的环状物即为阳性沉淀反应。 材料： 1. 免疫血清：免疫兔抗人血清 2. 抗原：人血清 3. 小沉淀管、毛细吸管、橡皮头、生理盐水。 方法： 1. 取小沉淀管 2 只，以毛细吸管吸取抗人血清约 0.2 毫升，加入第 一管，加时注意不能有气泡。 2. 以毛细吸管吸取生理盐水 0.2 毫升加入第二管。 3. 用毛细吸管吸入血稀释 0.2 毫升加入各管，加时应注意使抗原溶 液缓缓由管壁流下，轻浮于血清面上，使成一明显界面，切勿使之相混。 4. 置室温中 10—20 分钟，观察液面有无乳白色沉淀环，若有则为阳 性