D0I:10.13374/1.issnl00103.2007.s2.03 第29卷增刊2 北京科技大学学报 Vol.29 Suppl.2 2007年12月 Journal of University of Science and Technology Beijing Dee.2007 水源水中2MB降解菌的筛选 周北海王俊蔡珉敏祝玲宋文娟 北京科技大学土木与环境工程学院，北京100083 摘要针对特定水处理工艺，研究了投加2-MB前后水中微生物种群的变化，建立了筛选分离2一MB降解菌的方法.以 生物膜生长成熟的活性炭连续处理含有较高浓度2一MB水样，然后从活性炭表面取样，用2-MB为惟一碳源的无机盐培养 基筛选和驯养，最后进行划线分离，成功得到2-MIB降解菌种.通过16 S rRNA分析，该菌株属于假单胞菌属(Pseudomonas Pp·) 关键词水源水：2一MB:菌种筛选：假单胞菌属 分类号X172:X506 目前，各国给水厂面临的普遍问题之一是嗅味 源的无机盐培养基一段时间，使其表面生物膜生长 问题].致嗅物质的典型代表之一是2 成熟 methylisoborneol(2MIB)[I一一种具有土腥味的 确定微生物来源之后的富集和分离阶段则大致 Cyanobacteria代谢产物5].传统给水处理工艺对2 相同：以2MB为惟一碳源的无机培养基对所取得 MIB以及其他致嗅物质的去除率效果不理想，目 的微生物样本进行筛选，然后再转移至固体培养基 前处理效果较好的方法是将生物降解与其他工艺联 上进行纯化分离 合使用闪 我国对致嗅物质及其处理方法的研究尚少，2一 分离及鉴定2MIB降解菌种的成功案例较多： MIB降解菌分离的成功案例也未见报道， Izaguirre等人[8]分离出一种水生细菌并鉴定为 Pseudomonas spp·;Egashira等人[9]从生物滤池中分 1材料与方法 离出Pseudomonas spp·,Pseudomonas aeruginosa, 1.1实验药品与装置 Flavobacterium multivorum Flavobacterium 2-MIB标准溶液为100mgL的甲醇溶液，化 spp,;Tanaka等人o分离出两种微生物，分别属于 学纯度≥99%（美国SUPELC0公司），用纯水将标 Pseudomonas spp.Enterobacter spp.;Sumitomo 准溶液稀释成100gL的溶液，避光、冷藏备用 等人山叮鉴定出Candida spp为2-MB降解菌种； 活性炭处理水样的实验装置流程如图1所示. Ishida和Miyajil2]以及Lauderdale等人[分离出 实验装置进水为A水厂炭滤池进水，采用非循环供 Bacillus spp·;Lionel等人l]分离出多种微生物，分 水，炭柱空床接触时间(ECBT)为36min 别属于Pseudomonas spp,Alph呼roteobacterium, Sphingomonas spp.Acidobacteriaceae. 2一MIB降解菌中的分离方法基本类似，不同之 处主要在于微生物来源不同：Tanaka等人0从给 水厂生物滤池反冲洗水中获得降解菌种；Ishida和 Miya2]从富营养化湖泊中所取得的水样分离降解 水 菌种；Lionel等人[]从砂滤池中取样分离；Laud- erdale等人[的微生物来源是无烟煤表面，取样之 前，无烟煤作为滤料连续处理以2MB作为惟一碳 1一储水箱：2一曝气机：3一恒流泵；4一活性炭柱组 收稿日期：2007-10-12 图1实验装置图（流量3Lh':臭氧投加量1.5gL:活性 炭层φ28mmX450mm) 基金项目：北京市科委资助项目(Na-D0605004040421):北京科技 大学本科生创新基金(SRTP)资助项目 1.2实验方法 作者简介：周北海(1963-)男，教授，博士 (1)活性炭表面微生物分离
水源水中2－MIB 降解菌的筛选 周北海 王 俊 蔡珉敏 祝 玲 宋文娟 北京科技大学土木与环境工程学院北京100083 摘 要 针对特定水处理工艺研究了投加2－MIB 前后水中微生物种群的变化建立了筛选分离2－MIB 降解菌的方法．以 生物膜生长成熟的活性炭连续处理含有较高浓度2－MIB 水样然后从活性炭表面取样用2－MIB 为惟一碳源的无机盐培养 基筛选和驯养最后进行划线分离成功得到2－MIB 降解菌种．通过16S rRNA 分析该菌株属于假单胞菌属（ Pseudomonas spp．）． 关键词 水源水；2－MIB；菌种筛选；假单胞菌属 分类号 X172；X506 收稿日期：2007-10-12 基金项目：北京市科委资助项目（No．D0605004040421）；北京科技 大学本科生创新基金（SRTP）资助项目 作者简介：周北海（1963－）男教授博士 目前各国给水厂面临的普遍问题之一是嗅味 问题［1－3］． 致 嗅 物 质 的 典 型 代 表 之 一 是 2- methylisoborneol（2－MIB） ［4］－－－一种具有土腥味的 Cyanobacteria 代谢产物［5－6］．传统给水处理工艺对2 －MIB 以及其他致嗅物质的去除率效果不理想目 前处理效果较好的方法是将生物降解与其他工艺联 合使用［7］． 分离及鉴定2－MIB 降解菌种的成功案例较多： Izaguirre 等人［8］ 分离出一种水生细菌并鉴定为 Pseudomonas spp．；Egashira 等人［9］从生物滤池中分 离出 Pseudomonas spp．Pseudomonas aeruginosa Flavobacterium multivorum 和 Flavobacterium spp．；Tanaka 等人［10］分离出两种微生物分别属于 Pseudomonas spp．和 Enterobacter spp．；Sumitomo 等人［11］鉴定出 Candida spp．为2－MIB 降解菌种； Ishida 和 Miyaji ［12］ 以及 Lauderdale 等人［4］ 分离出 Bacillus spp．；Lionel 等人［13］分离出多种微生物分 别属于 Pseudomonas spp．A lphap roteobacterium Sphingomonas spp．和 Acidobacteriaceae． 2－MIB 降解菌中的分离方法基本类似不同之 处主要在于微生物来源不同：Tanaka 等人［10］ 从给 水厂生物滤池反冲洗水中获得降解菌种；Ishida 和 Miyaji ［12］从富营养化湖泊中所取得的水样分离降解 菌种；Lionel 等人［13］ 从砂滤池中取样分离；Lauderdale 等人［4］的微生物来源是无烟煤表面取样之 前无烟煤作为滤料连续处理以2－MIB 作为惟一碳 源的无机盐培养基一段时间使其表面生物膜生长 成熟． 确定微生物来源之后的富集和分离阶段则大致 相同：以2－MIB 为惟一碳源的无机培养基对所取得 的微生物样本进行筛选然后再转移至固体培养基 上进行纯化分离． 我国对致嗅物质及其处理方法的研究尚少2－ MIB 降解菌分离的成功案例也未见报道． 1 材料与方法 1∙1 实验药品与装置 2－MIB 标准溶液为100mg·L －1的甲醇溶液化 学纯度≥99％（美国 SUPELCO 公司）用纯水将标 准溶液稀释成100μg·L －1的溶液避光、冷藏备用． 活性炭处理水样的实验装置流程如图1所示． 实验装置进水为 A 水厂炭滤池进水采用非循环供 水．炭柱空床接触时间（ECBT）为36min． 1－储水箱；2－曝气机；3－恒流泵；4－活性炭柱组 图1 实验装置图（流量3L·h －1；臭氧投加量1∙5mg·L －1；活性 炭层●28mm×450mm） 1∙2 实验方法 （1）活性炭表面微生物分离． 第29卷 增刊2 2007年 12月 北 京 科 技 大 学 学 报 Journal of University of Science and Technology Beijing Vol．29Suppl．2 Dec．2007 DOI:10．13374／j．issn1001－053x．2007．s2．093
.228 北京科技大学学报 2007年增刊2 取适量生物膜生长成熟的活性炭，加入PBS缓 纯菌株的鉴定工作委托专业公司宝生物公司进 冲液震荡l0min,静置一段时间后用灭菌后的吸管 行 移取3~4滴菌悬液分别滴于PDA(马铃薯原液 从培养基中挑取纯菌株于10L灭菌水中，99 1000mL,葡萄糖20g,蛋白胨5g,KHP043g, ℃变性，离心后取上清液作为模板，使用Takara MgS041.5g,琼脂15g)、JCM42(酵母提取物1g,可 16SrDNA Bacterial Identification PCR Kit(Code No. 溶性淀粉5g,琼脂10q,纯水500mL,pH≈7)、LB D3lO),以Forward./Reverse primer?2为引物，扩增目 (胰化蛋白胨10gL-1,酵母提取物5gL1,NaC1 的片段，目标菌种编号为CTB358-1. 10gL1,琼脂10g,Na0H调pH至7.4)3种培养 使用Takara Agarose Gel DNA Purification Kit 基上，对应培养真菌、放线菌、好氧细菌，并用玻璃刮 Ver.2.0(Code No,DV8O5A)切胶回收目的片段，取 棒将菌悬液在培养基表面涂布均匀，使用前，玻璃 1L进行琼脂糖凝胶电泳， 刮棒已经无菌处理，用后立即在酒精灯上灼烧灭菌、 最后以Seq Forw ard,SEQ Reverse、Seq Internal 放置冷却，交替使用· 为引物对PCR产物进行DNA测序.将DNA序列 在28℃下，培养5~7d,对长成的菌落进行观 与NCBI基因数据库比较，确定菌种可能属于的种 察.对不同菌种进行革兰氏染色，用3600倍显微成 属 像系统对染色后的细菌样本进行观察 2结果与讨论 (2)2MIB降解菌的分离. 将一定量活性炭装入带有取样口的无机玻璃空 2.1活性炭表面微生物分离 心柱中，在臭氧一生物活性炭工艺条件运行2一3个 固体培养基表面生长出多种不同形态的菌落， 月，使活性炭表面生物膜生长成熟，然后再将活性 能用肉眼直接区别的菌种有22种. 炭柱转移至图1所示的实验装置中，向其中通入富 菌落颜色各异但均面积较小，直径在0.5~3.5 氧的含一定浓度2一MIB的炭滤池进水·逐步提高 mm之间，表面凸起且光滑有光泽，边缘平滑无褶 进水的2MIB浓度，从25ngL-到100ngL-1,持 皱 续运行45d后，从取样口采取活性炭样5g(湿重)， 分离出的微生物菌落中，细菌在种类还是数量 投入25 mL PBS缓冲液中剧烈震荡15min,取含菌 上都占了大多数，说明在水源水这样一个寡营养的 震荡液加入到含2MIB(100ngL-)的无机盐培养 环境中，细菌的耐受力和繁殖能力都较强 基(0.1%(w/w)NH4N03,0.1%(w/x)KH2P04, 显微镜观察经革兰氏染色后的各菌种样本，绝 0.05%(w/x)MgS04.7H20,0.02%(w/v)KCl, 大多数菌种均为革兰氏阴性好氧菌，其中以球菌为 pH=7)进行选择性培养富集，置于恒温摇床培养箱 主，并伴有少量的杆菌 (30℃，160r/min)条件下培养. 由于实验方法为常规的菌种培养、分离和鉴定 考虑到2一MIB的挥发和自然消耗以及培养基 程序，在操作过程中可能有部分微生物未能检出，因 中还可能存在可替代碳源，因此实验设置了两种对 此无法完全排除样品中存在其他菌种的可能性， 照组：投加相同浓度的2一MIB而不加含菌液，投加 2.22MB降解菌的分离 含菌液而不投加2一MIB.待培养基混浊后，按照 将含菌液转移至LB固体培养基96h后培养成 10%的接种量转接到下一批无机盐培养基中（同 熟，培养基表面出现目标菌落，见图2.目标菌落为 上)，培养5d,再按照10%的接种量转接到2-MIB 同质乳白色非透明菌落，直径0.5~3mm,表面光滑 浓度为300ngL的无机盐培养基中，培养5d,再 且微微隆起，边缘平滑 按照相同的接种量转接到2-MIB浓度为800ng· 与投加2-MIB之前的微生物分离实验结果相 L的无机盐培养基中，培养5d.如此反复进行培 比较，菌落种类与数量都大大减少，菌落面积也更 养，同时逐渐提高2MIB浓度(2000gL-1,60000 小.可以推测能将2一MB作为惟一碳源的微生物 ngL,10000ngL-1,15000ngL-1,20000ng· 较少，从微生物生长情况来看，2一MIB可能不是微 L1)·液体培养阶段结束后，取含菌液稀释250000 生物理想的营养物质，从而较大程度地降解2一MIB 倍后转移至LB固体培养基上培养，通过多次平板 比较困难，通过肉眼观察，分离出的菌落曾在投加 划线对培养基表面所生长出的微生物群落进行纯化 2MIB之前的实验中也被观察到，而且数量较多， 分离 本次分离实验微生物来源为生物膜生长成熟的 (3)2MIB降解菌的鉴定. 活性炭，微生物量丰富，含有目标菌种的可能性较
取适量生物膜生长成熟的活性炭加入 PBS 缓 冲液震荡10min静置一段时间后用灭菌后的吸管 移取3～4滴菌悬液分别滴于 PDA（马铃薯原液 1000mL葡萄糖 20g蛋白胨 5gKH2PO43g MgSO41∙5g琼脂15g）、JCM42（酵母提取物1g可 溶性淀粉5g琼脂10g纯水500mLpH≈7）、LB （胰化蛋白胨10g·L －1酵母提取物5g·L －1NaCl 10g·L －1琼脂10gNaOH 调 pH 至7∙4）3种培养 基上对应培养真菌、放线菌、好氧细菌并用玻璃刮 棒将菌悬液在培养基表面涂布均匀．使用前玻璃 刮棒已经无菌处理用后立即在酒精灯上灼烧灭菌、 放置冷却交替使用． 在28℃下培养5～7d对长成的菌落进行观 察．对不同菌种进行革兰氏染色用3600倍显微成 像系统对染色后的细菌样本进行观察． （2）2－MIB 降解菌的分离． 将一定量活性炭装入带有取样口的无机玻璃空 心柱中在臭氧－生物活性炭工艺条件运行2～3个 月使活性炭表面生物膜生长成熟．然后再将活性 炭柱转移至图1所示的实验装置中向其中通入富 氧的含一定浓度2－MIB 的炭滤池进水．逐步提高 进水的2－MIB 浓度从25ng·L －1到100ng·L －1持 续运行45d 后从取样口采取活性炭样5g（湿重） 投入25mL PBS 缓冲液中剧烈震荡15min取含菌 震荡液加入到含2－MIB（100ng·L －1）的无机盐培养 基（0∙1％ （w／v） NH4NO30∙1％ （w／v） KH2PO4 0∙05％ （w／v） MgSO4·7H2O0∙02％ （w／v） KCl pH＝7）进行选择性培养富集置于恒温摇床培养箱 （30℃160r／min）条件下培养． 考虑到2－MIB 的挥发和自然消耗以及培养基 中还可能存在可替代碳源因此实验设置了两种对 照组：投加相同浓度的2－MIB 而不加含菌液投加 含菌液而不投加2－MIB．待培养基混浊后按照 10％的接种量转接到下一批无机盐培养基中（同 上）培养5d再按照10％的接种量转接到2－MIB 浓度为300ng·L －1的无机盐培养基中培养5d再 按照相同的接种量转接到2－MIB 浓度为800ng· L －1的无机盐培养基中培养5d．如此反复进行培 养同时逐渐提高2－MIB 浓度（2000ng·L －160000 ng·L －110000ng·L －115000ng·L －120000ng· L －1）．液体培养阶段结束后取含菌液稀释250000 倍后转移至 LB 固体培养基上培养．通过多次平板 划线对培养基表面所生长出的微生物群落进行纯化 分离． （3）2－MIB 降解菌的鉴定． 纯菌株的鉴定工作委托专业公司宝生物公司进 行． 从培养基中挑取纯菌株于10μL 灭菌水中99 ℃变性离心后取上清液作为模板使用 Takara 16SrDNA Bacterial Identification PCR Kit（Code No． D310）以 Forward／Reverse primer2为引物扩增目 的片段目标菌种编号为 CTB358－1． 使用 Takara Agarose Gel DNA Purification Kit Ver．2．0（Code No．DV805A）切胶回收目的片段取 1μL 进行琼脂糖凝胶电泳． 最后以 Seq Forward、SEQ Reverse、Seq Internal 为引物对 PCR 产物进行 DNA 测序．将 DNA 序列 与 NCBI 基因数据库比较确定菌种可能属于的种 属． 2 结果与讨论 2∙1 活性炭表面微生物分离 固体培养基表面生长出多种不同形态的菌落 能用肉眼直接区别的菌种有22种． 菌落颜色各异但均面积较小直径在0∙5～3∙5 mm 之间表面凸起且光滑有光泽边缘平滑无褶 皱． 分离出的微生物菌落中细菌在种类还是数量 上都占了大多数说明在水源水这样一个寡营养的 环境中细菌的耐受力和繁殖能力都较强． 显微镜观察经革兰氏染色后的各菌种样本绝 大多数菌种均为革兰氏阴性好氧菌其中以球菌为 主并伴有少量的杆菌． 由于实验方法为常规的菌种培养、分离和鉴定 程序在操作过程中可能有部分微生物未能检出因 此无法完全排除样品中存在其他菌种的可能性． 2∙2 2－MIB 降解菌的分离 将含菌液转移至 LB 固体培养基96h 后培养成 熟培养基表面出现目标菌落见图2．目标菌落为 同质乳白色非透明菌落直径0∙5～3mm表面光滑 且微微隆起边缘平滑． 与投加2－MIB 之前的微生物分离实验结果相 比较菌落种类与数量都大大减少菌落面积也更 小．可以推测能将2－MIB 作为惟一碳源的微生物 较少从微生物生长情况来看2－MIB 可能不是微 生物理想的营养物质从而较大程度地降解2－MIB 比较困难．通过肉眼观察分离出的菌落曾在投加 2－MIB 之前的实验中也被观察到而且数量较多． 本次分离实验微生物来源为生物膜生长成熟的 活性炭微生物量丰富含有目标菌种的可能性较 ·228· 北 京 科 技 大 学 学 报 2007年 增刊2
Vol.29 Suppl.2 周北海等：水源水中2一MB降解菌的筛选 .229 高.相对于Ishida和Miyajil2]直接从富营养化水样 离，得到20多种菌种，绝大部分均为革兰氏阴性好 中分离2MB降解菌种针对性更强，实验操作难度 氧菌，并以球菌为主， 较低。而相对于Lauderdale等人[的分离方法，也 通过2一MIB降解菌分离方法得到一株菌株并 节省了数量可观的实验原料，同时并没有影响到实 鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas spp·),说明活性 验结果 炭样本表面存在可降解2MIB的微生物. 通过试验中的分离方法，成功地筛选出2-MIB 日标菌落 降解菌，与以往的分离方法相比，降低了实验操作难 度，节省了实验耗材 参考文献 [1]Yagi M,Hashimoto T,Kajino M.et al.Musty odour problems in Japanese water supply.Water Supply.1985,4:159 图2目标菌落 [2]Suffet I H.Corado A.Chou D.et al.AWWA taste and odor sur- vey-J Am Water Works Assoc.1996.88(4):166 2.32MB降解菌的鉴定 [3]Persson P.Off flavours in aquatic ecosystems an introduction. 两次琼脂糖凝胶电泳结果如图3所示 Water Sci Technol.1983,15:1 M12 3 4 [4]Lauderdalea C V.Aldrichb H C.Lindnera A S.Isolation and characterization of a bacterium capable of removing taste and M-DNA Marker DL2 000 1CTB358-1PCR产物 odorcausing 2-methylisoborneol from water.Water Res,2004, 3一正对照 38,4135 4一负对照 [5]Westerhoff P,Rodriguez-Hernandez M.Baker L.et al.Seasonal occurrence and degradation of 2-methylisoborneol in water supply reservoirs.Water Res.2005,39:4899 [6]Zimmerman W J.Soliman C M.Rosen B H.Growthand 2- methylisoborneol production by the cyanobacterium Phorium LM M-DNA Marker DL2 000 1CTB358-1 689.Water Sci Technol,1995.31(11):181 [7]Nerenberg R,Rittmann B E,Soucie W J.Ozone/biofiltration for removing MIB and geosmin.J Am Water Works Assoc.2000.92 (12):85 图3电泳分析结果 [8]Izaguirre G.Wolfe R L,Means III E G.Degradation of 2- methylisoborneol by aquatic bacteria.Appl Environ Microbiol. 将测序结果与数据库比对，分离出的菌株属于 1988,54.2424 假单胞菌属(Pseudomonas spp·),其同源性大于 [9]Egashira K,Ito K.Yoshiy Y.Removal of musty odour compound 99%. in drinking water by biological filter.Water Sci Technol.1992. 25,307 从目前的文献来看，假单胞菌多次作为2MIB [10]Tanaka A.Oritani T,Uehara F,et al.Biodegradation of a musty 降解菌种被成功分离出来，并且对其降解产物有初 odour component.2-methylisoborneol.Water Res,1996.30: 步的研究，但其生物特性及降解规律有待进一步研 759 究 [11]Sumitomo H.Odor decomposition by the yeast Candida.Water Sci Technol,1988,20.157 本实验中固体培养基表面还存在若干其他菌 落，个体微小，数量极少，但不能排除其也为2一MIB [12]Ishida H.Miyaji Y.Biodegradation of 2-methylisoborneol by oligotrophic bacterium isolated from eutrophied lake.Water Sci 降解菌的可能性，其种属和特性有待进一步鉴定和 Technol,1992,25,269 研究 [13]Ho L,Newcombe G.Croue J P.Influence of the character of NOM on the ozonation of MIB and geosmin.Water Res.2002. 3 结论 36.511 投加2一MB之前对活性炭表面微生物进行分
高．相对于 Ishida 和 Miyaji ［12］直接从富营养化水样 中分离2－MIB 降解菌种针对性更强实验操作难度 较低．而相对于 Lauderdale 等人［4］ 的分离方法也 节省了数量可观的实验原料同时并没有影响到实 验结果． 图2 目标菌落 2∙3 2－MIB 降解菌的鉴定 两次琼脂糖凝胶电泳结果如图3所示． 图3 电泳分析结果 将测序结果与数据库比对分离出的菌株属于 假单胞菌属 （ Pseudomonas spp．）其同源性大于 99％． 从目前的文献来看假单胞菌多次作为2－MIB 降解菌种被成功分离出来并且对其降解产物有初 步的研究但其生物特性及降解规律有待进一步研 究． 本实验中固体培养基表面还存在若干其他菌 落个体微小数量极少但不能排除其也为2－MIB 降解菌的可能性其种属和特性有待进一步鉴定和 研究． 3 结论 投加2－MIB 之前对活性炭表面微生物进行分 离得到20多种菌种绝大部分均为革兰氏阴性好 氧菌并以球菌为主． 通过2－MIB 降解菌分离方法得到一株菌株并 鉴定为假单胞菌属（ Pseudomonas spp．）说明活性 炭样本表面存在可降解2－MIB 的微生物． 通过试验中的分离方法成功地筛选出2－MIB 降解菌与以往的分离方法相比降低了实验操作难 度节省了实验耗材． 参 考 文 献 ［1］ Yagi MHashimoto TKajino Met al．Musty odour problems in Japanese water supply．Water Supply19854：159 ［2］ Suffet I HCorado AChou Det al．AWWA taste and odor survey．J Am Water Works Assoc199688（4）：166 ［3］ Persson P．Off-flavours in aquatic ecosystems-an introduction． Water Sci Technol198315：1 ［4］ Lauderdalea C VAldrichb H CLindnera A S．Isolation and characterization of a bacterium capable of removing taste- and odo-r causing 2-methylisoborneol from water．Water Res2004 38：4135 ［5］ Westerhoff PRodriguez-Hernandez MBaker Let al．Seasonal occurrence and degradation of 2-methylisoborneol in water supply reservoirs．Water Res200539：4899 ［6］ Zimmerman W JSoliman C MRosen B H．Growthand 2- methylisoborneol production by the cyanobacterium Phorium LM 689．Water Sci Technol199531（11）：181 ［7］ Nerenberg RRittmann B ESoucie W J．Ozone／biofiltration for removing MIB and geosmin．J Am Water Works Assoc200092 （12）：85 ［8］ Izaguirre GWolfe R LMeans III E G．Degradation of 2- methylisoborneol by aquatic bacteria．Appl Environ Microbiol 198854：2424 ［9］ Egashira KIto KYoshiy Y．Removal of musty odour compound in drinking water by biological filter．Water Sci Technol1992 25：307 ［10］ Tanaka AOritani TUehara Fet al．Biodegradation of a musty odour component2-methylisoborneol．Water Res199630： 759 ［11］ Sumitomo H．Odor decomposition by the yeast Candida．Water Sci Technol198820：157 ［12］ Ishida HMiyaji Y．Biodegradation of 2-methylisoborneol by oligotrophic bacterium isolated from eutrophied lake．Water Sci Technol199225：269 ［13］ Ho LNewcombe GCroue J P．Influence of the character of NOM on the ozonation of MIB and geosmin．Water Res2002 36：511 Vol．29Suppl．2 周北海等： 水源水中2－MIB 降解菌的筛选 ·229·
.230, 北京科技大学学报 2007年增刊2 Isolation of a bacterium capable of removing 2-methylisoborneol from water ZHOU Beihai,WANG Jun,CAI Minmin,ZHU Ling,SONG Wenjuan School of Civil and Environmental Engineering,University of Science and Technology Beijing.Beijing 100083,China ABSTRACI For the given water treatment,the features of the microbiological colonies before and after the ad- dition of the 2-methylisoborneol(2 MIB)were studied,and a method for isolation of a bacterium capable of re- moving the 2 MIB from the water was proposed.The procedure of the method was as follows:the activated carbon,whose surface was covered by a mature microbiological membrane,was employed to continually treat the water with higher concentration of 2 MIB,and then the sample gained from the surface of the activated carbon was cultivated in the mineral salt liquid culture in which 2 MIB was the only carbon source;finally,one strain, which was identified as Pseudomonas spp.based on the data of 16S rRNA analysis,was isolated by plate streaks. KEY WORDS source water:2 MIB:microbiological isolation:Pseudomonas spp
Isolation of a bacterium capable of removing2-methylisoborneol from water ZHOU BeihaiWA NG JunCAI MinminZHU L ingSONG Wenjuan School of Civil and Environmental EngineeringUniversity of Science and Technology BeijingBeijing100083China ABSTRACT For the given water treatmentthe features of the microbiological colonies before and after the addition of the2-methylisoborneol （2－MIB） were studiedand a method for isolation of a bacterium capable of removing the2－MIB from the water was proposed．The procedure of the method was as follows：the activated carbonwhose surface was covered by a mature microbiological membranewas employed to continually treat the water with higher concentration of 2－MIBand then the sample gained from the surface of the activated carbon was cultivated in the mineral salt liquid culture in which2－MIB was the only carbon source；finallyone strain which was identified as Pseudomonas spp．based on the data of 16S rRNA analysiswas isolated by plate streaks． KEY WORDS source water；2－MIB；microbiological isolation；Pseudomonas spp． ·230· 北 京 科 技 大 学 学 报 2007年 增刊2