附实验二、线虫纲2示钩虫、丝虫和旋毛虫形态图片 两种钩虫体态 两种钩虫口囊 钩虫雄虫交合伞和交合刺 钩虫卵与脱蛋白质膜的蝈虫卵比较 16
16 附 实验二、线虫纲 2 示钩虫、丝虫和旋毛虫形态图片 两种钩虫体态 两种钩虫口囊 钩虫雄虫交合伞和交合刺 钩虫卵与脱蛋白质膜的蛔虫卵比较
● ·马来丝虫微丝蚴 。班氏丝虫微丝蝴 &malayiroria● 旋毛虫幼虫 Larva of Trichinella spirallis 17
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实验三、吸虫纲 华枝睾吸虫（肝吸虫）Clonoreh依sinens西 布氏姜片吸虫（姜片虫）Fasciolopsis buski 卫氏并殖吸虫（肺吸虫）Paragonimus westermani 日本裂体吸虫（日本血吸虫）Schistosome jo仰onicum 目的要求 1、掌握虫四种吸虫虫卵的形态特征。 2、熟悉四种吸虫的生活史的要点。 3、了解氢氧化钠消化法、粪便自然沉淀法和毛蚴孵化法。 技术操作 1、NaOH痰液消化法（常用消化沉淀法） 收集患者24小时痰液，置于玻杯中，加入等量50~1O0g/LNaOH 溶液，用玻棒搅匀后，放入37~C温箱内，数小时后痰液消化成稀液 状。分装于数个离心管内，~1500r/min离心5~1Omin,取沉渣涂片 检查。 沉淀法：原虫包囊和吸虫卵的比重大，可沉集于水底，有助于提高检 出率，但比重较小的钩虫卵和原虫包囊则效果较差。沉淀法又分自然 沉淀和离心沉淀法。 2、自然沉淀法：取患者粪便15，加水调成混悬液，经金属筛或 18
18 实 验 三、吸虫纲 华枝睾吸虫(肝吸虫)Clonorchis sinensis 布氏姜片吸虫(姜片虫)Fasciolopsis buski 卫氏并殖吸虫(肺吸虫)Paragonimus westermani 日本裂体吸虫(日本血吸虫)Schistosome japonicum 目的要求 1、掌握虫四种吸虫虫卵的形态特征。 2、熟悉四种吸虫的生活史的要点。 3、了解氢氧化钠消化法、粪便自然沉淀法和毛蚴孵化法。 技术操作 1、 NaOH 痰液消化法(常用消化沉淀法) 收集患者 24 小时痰液，置于玻杯中，加入等量 50～lOOg／L NaOH 溶液，用玻棒搅匀后，放入 37~C 温箱内，数小时后痰液消化成稀液 状。分装于数个离心管内，~1500r／min 离心 5～lOmin，取沉渣涂片 检查。 沉淀法：原虫包囊和吸虫卵的比重大，可沉集于水底，有助于提高检 出率，但比重较小的钩虫卵和原虫包囊则效果较差。沉淀法又分自然 沉淀和离心沉淀法。 2、自然沉淀法：取患者粪便 1s，加水调成混悬液，经金属筛或
用二、三层纱布过滤于尖底量杯，再加清水，并冲洗筛上的残渣，直 至量杯将满，静置25min,倾去上液，重新加满清水，以后每隔15 25min换水一次，直至上液清晰为止，最后倾去上清液，取沉渣镜检。 3、离心沉淀法：将滤液的粪便，置离心管中，以每分钟1500一 2000转的速度离心1一2min,倾去上液，注入清水，调匀，再离心 沉淀，如此反复3一4次，直到上清液澄清为止，倾去上清液，职沉渣 镜检。 4、毛蚴孵化法：依据粪便内排出的虫卵较少，先浓集，后依据虫 卵内的毛蚴在适宜温度的清水中，短时间内可孵出的特性而设计的 用于早期血吸虫病患者的粪便检查。 ①用竹棒取30g左右粪便，通过铜丝网过滤于锥形杯内用水冲 粪渣。再加水近杯口2cm处，静置25min,倾去上层粪水，留下沉淀， 然后再加满清水。 ②以后每隔20min换水一次，直至上清液清晰为止。 ③最后倾去上清液，取沉淀物镜检，常规需查看三片。 ④将沉淀倒入500ml三角烧瓶内，加入清水至瓶口处，放入 25℃温箱中孵化。 ⑤隔4一6h后第一次观察孵出毛蚴，观察时注意瓶颈部有无白 色小点，作直线运动（水平方向或斜方向）的毛蚴。如未见毛蚴应重 19
19 用二、三层纱布过滤于尖底量杯，再加清水，并冲洗筛上的残渣，直 至量杯将满，静置 25min，倾去上液，重新加满清水，以后每隔 15— 25min 换水一次，直至上液清晰为止，最后倾去上清液，取沉渣镜检。 3、离心沉淀法：将滤液的粪便，置离心管中，以每分钟 1500— 2000 转的速度离心 1—2min，倾去上液，注入清水，调匀， 再离心 沉淀，如此反复 3—4 次，直到上清液澄清为止，倾去上清液，职沉渣 镜检。 4、毛蚴孵化法：依据粪便内排出的虫卵较少，先浓集，后依据虫 卵内的毛蚴在适宜温度的清水中，短时间内可孵出的特性而设计的 用于早期血吸虫病患者的粪便检查。 ① 用竹棒取 30g 左右粪便，通过铜丝网过滤于锥形杯内用水冲 粪渣。再加水近杯口 2cm 处,静置 25min，倾去上层粪水，留下沉淀， 然后再加满清水。 ② 以后每隔 20min 换水一次，直至上清液清晰为止。 ③ 最后倾去上清液，取沉淀物镜检，常规需查看三片。 ④ 将沉淀倒入 500ml 三角烧瓶内，加入清水至瓶口处，放入 25℃温箱中孵化。 ⑤ 隔 4—6h 后第一次观察孵出毛蚴，观察时注意瓶颈部有无白 色小点，作直线运动(水平方向或斜方向)的毛蚴。如未见毛蚴应重
新放入孵箱，12一24h后再观察一次。 注意点： 1.粪便必须新鲜，如不新鲜或类量过少都可影响检出率。 2.沉淀换水时必须至上清液澄清为止，否则影响，观察结果。 3.换水倾倒时不能间断，以免沉渣浮起倒掉。 4.孵化用水必须是清水，pH7.2~7.6,如含盐分、残余氯过 多或含NH3均会影响孵化。 5.操作过程，应绝对防止相互污染，所有器材反复清洗，并用 沸水浸泡。 6:观察结果必须与水虫鉴别，毛蚴为针尖大小，长圆形，灰申 色，折光，大小一致，常在离水面1一4cm处作直线迅速游动，碰 壁才转向，必要时，可将其吸取镜检。 5、环卵沉淀反应：含毛蚴的成熟血吸虫卵内，“可溶性抗原”可 通过卵壳渗透到卵的周围与血吸虫病人血清中的抗体相结合，在卵 壳周围形成泡状、带状、指状大小不等的沉淀物，即为阳性反应。 操作方法如下： ①在洁净的载玻片上滴上受检者血清2滴。 ②用针尖挑取冻干血吸虫卵约100个，与血清混匀。 ③复盖22x22mm盖玻片，四周用石腊密封，放入37C温盒中。 20
20 新放入孵箱,12—24h 后再观察一次。 注意点 ： 1．粪便必须新鲜，如不新鲜或粪量过少都可影响检出率。 2．沉淀换水时必须至上清液澄清为止，否则影响，观察结果。 3 . 换水倾倒时不能间断，以免沉渣浮起倒掉。 4. 孵化用水 必须是清水，pH 7.2～7.6，如含盐分、残余氯过 多或含 NH3 均会影响孵化。 5. 操作过程，应绝对防止相互污染，所有器材反复清洗，并用 沸水浸泡。 6；观察结果必须与水虫鉴别，毛蚴为针尖大小，长圆形，灰申 色，折光，大小一致，常在离水面 1—4cm 处作直线迅速游动，碰 壁才转向，必要时，可将其吸取镜检。 5、环卵沉淀反应：含毛蚴的成熟血吸虫卵内，“可溶性抗原”可 通过卵壳渗透到卵的周围与血吸虫病人血清中的抗体相结合，在卵 壳周围形成泡状、带状、指状大小不等的沉淀物，即为阳性反应。 操作方法如下： ①在洁净的载玻片上滴上受检者血清 2 滴。 ②用针尖挑取冻干血吸虫卵约 100 个，与血清混匀。 ③复盖 22x22mm 盖玻片，四周用石腊密封，放入 37'C 温盒中