实验二、线虫纲2 十二指肠钩口线虫（十二指肠钩虫） Ancylostoma duodenale 美洲板口线虫（美洲钩虫）Necator americanus 班氏吴策线虫（班氏丝虫）uchereria bancrofti 马来布鲁线虫（马来丝虫）Brugia malayi 旋毛形线虫旋毛虫)及其他线虫 Trichinela spiralis and others 目的要求 1、掌握钩虫卵、班氏和马来微丝蚴的形态特征。 2、熟悉钩虫和丝虫的生活史特点。 3、了解饱和盐水浮集法、钩蚴培养法、厚血膜制作法。 技术操作 1、饱和盐水浮集法：利用饱和盐水比重较大，使虫卵上浮，集中于 液体表面，达到浓集的目的。本法以检查钩虫卵效果最好。 ①置黄豆大小粪便（约1克），置于盛有少量饱和盐水的漂浮杯中。 ②用竹签将粪便捣碎充分调匀后，加饱和盐水至杯口。 ③职载玻片盖于杯口，玻片下不可留有气泡，静置15分钟。 ④向上提起载玻片，·迅速翻转玻片，镜检（必要时复加盖玻片）。 11
11 实验二、线虫纲 2 十二指肠钩口线虫(十二指肠钩虫) Ancylostoma duodenale 美洲板口线虫(美洲钩虫) Necator americanus 班氏吴策线虫(班氏丝虫) Wuchereria bancrofti 马来布鲁线虫(马来丝虫) Brugia malayi 旋毛形线虫(旋毛虫)及其他线虫 Trichinela spiralis and others 目的要求 1、掌握钩虫卵、班氏和马来微丝蚴的形态特征。 2、熟悉钩虫和丝虫的生活史特点。 3、了解饱和盐水浮集法、钩蚴培养法、厚血膜制作法。 技术操作 1、饱和盐水浮集法：利用饱和盐水比重较大，使虫卵上浮，集中于 液体表面，达到浓集的目的。本法以检查钩虫卵效果最好。 ①置黄豆大小粪便(约 1 克)，置于盛有少量饱和盐水的漂浮杯中。 ② 用竹签将粪便捣碎充分调匀后，加饱和盐水至杯口。 ③ 职载玻片盖于杯口，玻片下不可留有气泡，静置 15 分钟。 ④ 向上提起载玻片，·迅速翻转玻片，镜检(必要时复加盖玻片)
2、钩蚴培养法：根据钩虫卵在适宜条件下，数日内孵出幼虫的原理设 计的。可用肉眼或放大镜观察，阳性率比粪便涂片高7倍，且超过饱 和盐水浮聚法，此法还可鉴别虫种。 ①将滤纸剪成与试管口径等宽的纸条。 ②职半粒黄豆大小粪便，均匀涂布滤纸条中部。 ③将纸条放入盛有约2毫升冷开水的试管内，下端浸入水中，勿 使粪便接触水。 ④置于25℃温箱中培养，5一7天后观察钩蚴，每天需添加少量 清水以保持液面高度。 ⑤钩蚴在水中作蛇样活动，肉眼可见。如需作虫种鉴定应吸出钩 蚴在显微镜下观察。 3、厚血膜法：适于诊断丝虫病的基本方法。 ①根据微丝蚴在外周血液中夜多昼少的特点，检查微丝蚴宜晚间 10时左右取血，用？0%酒精棉球消毒受检查者耳垂或指尖，待干后以 消毒之刺血针刺耳垂缘或指尖，使血液流出。 ②取一洁净载玻片，使载玻片中心接触耳缘或指尖取血三大滴 (约60u1),以另一洁净玻片一角，将三滴血涂成直径约1.5cm的圆形 厚血膜，平放待干。 ③将已干之厚血膜，置清水中溶血，脱去血红蛋白，血膜成乳白 12
12 2、钩蚴培养法：根据钩虫卵在适宜条件下，数日内孵出幼虫的原理设 计的。可用肉眼或放大镜观察，阳性率比粪便涂片高 7 倍，且超过饱 和盐水浮聚法，此法还可鉴别虫种。 · ① 将滤纸剪成与试管口径等宽的纸条。 ② 职半粒黄豆大小粪便，均匀涂布滤纸条中部。 ③ 将纸条放入盛有约 2 毫升冷开水的试管内，下端浸入水中, 勿 使粪便接触水。 ④ 置于 25℃温箱中培养，5—7 天后观察钩蚴，每天需添加少量 清水以保持液面高度。 ⑤ 钩蚴在水中作蛇样活动，肉眼可见。如需作虫种鉴定应吸出钩 蚴在显微镜下观察。 3、厚血膜法：适于诊断丝虫病的基本方法。 ① 根据微丝蚴在外周血液中夜多昼少的特点，检查微丝蚴宜晚间 l0 时左右取血，用?o％酒精棉球消毒受检查者耳垂或指尖，待干后以 消毒之刺血针刺耳垂缘或指尖，使血液流出。 ② 取一洁净载玻片， 使载玻片中心接触耳缘或指尖取血三大滴 (约 60u1)，以另一洁净玻片一角，将三滴血涂成直径约 1.5cm 的圆形 厚血膜，平放待干。 ③ 将已干之厚血膜，置清水中溶血，脱去血红蛋白，血膜成乳白
色后取出，待干后染色。 观察标本 1、钩虫卵：呈椭园形，大小约为60x40um,无色透明，卵壳薄， 壳内常含4一8个细胞，卵细胞与卵壳之间有明显的空隙。如粪便放置 较久，卵内细胞可继续分裂，甚至发育为幼虫。 2、十二指肠钩虫头部玻片标本：前端有口囊，口囊腹侧有两对钩 齿由于钩虫头部向背面仰曲，因此腹侧钩齿位于虫体顶端。 3、美洲钩虫头部玻片标本：口囊腹侧有一对半月形板齿。 4、班氏微丝蚴（染色玻片标本）：先用低倍镜寻找在厚血膜中细小 弯曲的微丝蚴，然后转高倍镜或油镜观察内部结构，班氏微丝蚴为244 一296x5.3一7um,体态弯曲自然柔和，前端钝圆，后端尖细，体外被 有一层浅兰色鞘膜。体内有许多染成兰色的体核，圆形，大小和分布 均匀，清晰可见，体前端有一无核空隙，称头间隙。班氏微丝蚴的头 间隙较短，长 宽之比为1：1，神经环明显，体核分布到后端，无尾核。 5、马来微丝蚴（染色玻片标本）：马来微丝蚴较班氏微丝蚴小，大 小为177一230x5一6um,体被鞘膜，虫体弯曲不自然，比较僵直，并 有小的弯曲。体核椭圆形，大小不等，分布不整齐，常互相重叠，不 易分清，头间隙较长，长宽之比约2：1，尾端的略膨大可见二个尾 13
13 色后取出，待干后染色。 观察标本 1、钩虫卵：呈椭园形，大小约为 60x40urn ,无色透明，卵壳薄， 壳内常含 4—8 个细胞，卵细胞与卵壳之间有明显的空隙。如粪便放置 较久，卵内细胞可继续分裂，甚至发育为幼虫。 2、十二指肠钩虫头部玻片标本：前端有口囊，口囊腹侧有两对钩 齿由于钩虫头部向背面仰曲，因此腹侧钩齿位于虫体顶端。 3、美洲钩虫头部玻片标本：口囊腹侧有一对半月形板齿。 4、班氏微丝蚴(染色玻片标本)：先用低倍镜寻找在厚血膜中细小 弯曲的微丝蚴，然后转高倍镜或油镜观察内部结构，班氏微丝蚴为 244 —296x5.3—7um，体态弯曲自然柔和，前端钝圆，后端尖细，体外被 有一层浅兰色鞘膜。体内有许多染成兰色的体核，圆形，大小和分布 均匀，清晰可见，体前端有一无核空隙，称头间隙。班氏微丝蚴的头 间隙较短，长 宽之比为 1：1，神经环明显，体核分布到后端，无尾核。 5、马来微丝蚴(染色玻片标本)：马来微丝蚴较班氏微丝蚴小，大 小为 177—230x5—6urn，体被鞘膜，虫体弯曲不自然，比较僵直，并 有小的弯曲。体核椭圆形，大小不等，分布不整齐，常互相重叠，不 易分清，头间隙较长，长宽之比约 2：1， 尾端的略膨大可见二个尾
核，呈前后排列。 6、旋毛虫囊包玻片标本：本囊包位于横纹肌内，呈梭形，长轴与 肌纤维并行，内有1一2个幼虫。 。 示教标本 1、十二指肠钩虫成虫固定标本（肉眼观察）：淡白色，细线状，约 lcm长，头部和尾部弯曲一致，略似“C”字形，雌虫尾端圆锥形，雄 虫较小，尾端膨大形成交合伞。 2、美洲钩虫成虫固定标本（肉眼观察）：较十二指肠钩虫略小，头 部向背侧弯曲，尾端向腹侧弯曲略呈“S”形。 3、十二指肠钩虫雄虫尾部玻片标本（镜下观察）：尾部膨大成交合 伞，侧面观其宽度大于长度，两根交合刺末端分开。 4、美洲钩虫雄虫尾部玻片标本（镜下观察）：交合伞侧面观长宽相 仿，两根交合刺末端合并，并形成倒钩。 5、钩虫丝状蚴（镜下观察）：呈长圆柱形，美洲钩虫的咽管矛明显 鞘膜横纹显著，十二指肠钩虫丝状蚴的咽管予及鞘膜横纹不清楚。 6,钩虫附着肠壁的标本（瓶装标本）。 7、狗丝虫成虫：瓶装标本 8、班氏丝虫腊肠期幼虫玻片标本：从淡色库蚊胸肌中剖得，虫体 粗短，形如腊肠。 14
14 核，呈前后排列。 6、旋毛虫囊包玻片标本：本囊包位于横纹肌内，呈梭形，长轴与 肌纤维并行，内有 1—2 个幼虫。 。 示教标本 1、十二指肠钩虫成虫固定标本(肉眼观察)：淡白色，细线状，约 lcm 长，头部和尾部弯曲一致，略似“C”字形，雌虫尾端圆锥形，雄 虫较小，尾端膨大形成交合伞。 2、美洲钩虫成虫固定标本(肉眼观察)：较十二指肠钩虫略小，头 部向背侧弯曲，尾端向腹侧弯曲略呈“S”形。 3、十二指肠钩虫雄虫尾部玻片标本(镜下观察)：尾部膨大成交合 伞，侧面观其宽度大于长度，两根交合刺末端分开。 4、美洲钩虫雄虫尾部玻片标本(镜下观察)：交合伞侧面观长宽相 仿，两根交合刺末端合并，并形成倒钩。 5、钩虫丝状蚴(镜下观察)：呈长圆柱形，美洲钩虫的咽管矛明显 鞘膜横纹显著，十二指肠钩虫丝状蚴的咽管予及鞘膜横纹不清楚。 6，钩虫附着肠壁的标本(瓶装标本)。 7、狗丝虫成虫：瓶装标本 8、班氏丝虫腊肠期幼虫玻片标本：从淡色库蚊胸肌中剖得，虫体 粗短，形如腊肠
9、班氏丝虫感染期幼虫：幼虫移行已达蚊的下唇中，部分虫体己 从下唇前端逸出。 10、中间宿主：淡色库蚊，中华按蚊。 11、美丽筒线虫：虫体长2一7Cm,体表有纤细横纹，虫体前端表 皮具明显纵行排列，大小不等，数目不同的花缘状表皮突，在前端排 成4行，延至近侧翼处增为8行。 12、结膜吸吮线虫：成虫长约0-5一2cm,虫体呈乳白色，半透明， 虫体除头尾两端体表光滑外，其余部分均折皱为微细横纹，横纹边缘 锐利呈锯齿形。 思考题 1、钩虫卵与脱蛋白膜的蛔虫卵怎样区别？ 2、通过输血能否感染丝虫？为什么？， 3、怎样鉴别两种丝虫微丝蚴？ 作业：绘钩虫卵、班氏微丝蚴、马来微丝蚴、旋毛虫囊包。 5
15 9、班氏丝虫感染期幼虫：幼虫移行已达蚊的下唇中，部分虫体己 从下唇前端逸出。 10、中间宿主：淡色库蚊，中华按蚊。 11、美丽筒线虫：虫体长 2—7cm，体表有纤细横纹，虫体前端表 皮具明显纵行排列，大小不等，数目不同的花缘状表皮突，在前端排 成 4 行，延至近侧翼处增为 8 行。 12、结膜吸吮线虫：成虫长约 0-5—2cm，虫体呈乳白色，半透明， 虫体除头尾两端体表光滑外，其余部分均折皱为微细横纹，横纹边缘 锐利呈锯齿形。 思考题 1、钩虫卵与脱蛋白膜的蛔虫卵怎样区别? 2、通过输血能否感染丝虫?为什么? ’ 3、怎样鉴别两种丝虫微丝蚴? 作业：绘钩虫卵、班氏微丝蚴、马来微丝蚴、旋毛虫囊包