(三)荧光显微镜 样品制备 ·免疫荧光技术 荧光分子 。 荧光素直接标记技术 抗体 ·绿色荧光蛋白(GFP)的 抗原 基因与编码某种蛋白质 的基因相融合表达 Gene X GFP Transcription 。i 两种以上荧光素标记同 mRNA GFP Translation 一样品，可同时显示不 -GFP protein 同成分在细胞中的定位 (双重标记) Protein X
（三）荧光显微镜——样品制备 • 免疫荧光技术 • 荧光素直接标记技术 • 绿色荧光蛋白(GFP)的 基因与编码某种蛋白质 的基因相融合表达 • 两种以上荧光素标记同 一样品，可同时显示不 同成分在细胞中的定位 (双重标记)
(三) 荧光显微镜一应用 。 在光镜水平上， 对细胞内特异的 蛋白质、核酸、 原纤维状蛋白 糖类、脂质以及 染色体 纺锤体微管 某些离子等组分 进行定性、定位 研究的有力工具 荧光显微镜显示出在有丝分裂中期细胞中，纺锤体 微管（绿色）、中期染色体（蓝色）和原纤维状蛋 白（(fibrillarin)(红色)等结构成分
（三）荧光显微镜——应用 • 在光镜水平上， 对细胞内特异的 蛋白质、核酸、 糖类、脂质以及 某些离子等组分 进行定性、定位 研究的有力工具 荧光显微镜显示出在有丝分裂中期细胞中，纺锤体 微管（绿色）、中期染色体（蓝色）和原纤维状蛋 白（fibrillarin）（红色）等结构成分
(四)激光扫描共焦显微镜 ·以激光为光源 检测器 ·扫描激光的汇聚与荧光的收集共 用一个透镜，物镜的焦点即扫描 共焦小孔 激光的聚焦点，也是瞬时成像的 双色镜 物点。排除焦平面以外光成像。 光源 ·利用激光扫描装置和计算机高速 采集与处理系统汇聚每一个点上 物镜 的信息，形成清晰的二维图像。 ·分辨率是普通荧光显微镜的 样品 焦点 1.4~1.7倍 激光束 焦点处发射的荧光 非焦点处发射的荧光
（四）激光扫描共焦显微镜 • 以激光为光源 • 扫描激光的汇聚与荧光的收集共 用一个透镜，物镜的焦点即扫描 激光的聚焦点，也是瞬时成像的 物点。排除焦平面以外光成像。 • 利用激光扫描装置和计算机高速 采集与处理系统汇聚每一个点上 的信息，形成清晰的二维图像。 • 分辨率是普通荧光显微镜的 1.4～1.7 倍
(四)激光扫描共焦显微镜 。 可通过“光学切片”叠加后重构出样品的三维结构 (A) (B) (C) confocal pinholes B dichroic mirror laser objective 3-D specimen point of focus fluorescent specimen is illuminated emitted fluorescent emitted light from out- with a focused point of light from light from in-focus of-focus point is out of a pinhole point is focused at focus at pinhole and pinhole and reaches is largely excluded detector from detector Figure 9-20 Molecular Biology of the Cell(Garland Science 2008)
（四）激光扫描共焦显微镜 • 可通过“光学 切片” 叠加后重构出样品的三维结构 Figure 9-20 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
荧光显微镜像(a) 和激光扫描共焦显微镜像(b) (a)Conventional fluorescence microscopy (b)Confocal fluorescence microscopy 40 um Focal Imaged Focal Imaged plane volume plane volume Figure 9-18 Molecular Cell Biology,Sixth Edition 2008 W.H.Freeman and Company
荧光显微镜像（a）和激光扫描共焦显微镜像（b）