3血脑屏障常用参数的测定方法 ·血脑屏障常用参数的测定方法主要包括计算机预测、体外 模型测试和体内模型测试等。计算机模拟具有高效快捷的 优点但是其准确性相对较差;体外测试高效快速,但与血脑 屏障性质也存在一定的差异准确度相对较高;体内测试可 以提供准确的数据,但操作繁琐、花费较髙,无法实现髙通 量
3血脑屏障常用参数的测定方法 • 血脑屏障常用参数的测定方法主要包括计算机预测、体外 模型测试和体内模型测试等。计算机模拟具有高效快捷的 优点,但是其准确性相对较差;体外测试高效快速,但与血脑 屏障性质也存在一定的差异,准确度相对较高;体内测试可 以提供准确的数据,但操作繁琐、花费较高,无法实现高通 量
31计算机模拟 ·计算机模型的测定方法具有廉价、高效及快捷的优点,常用于化合 物库的筛选,极大地节约了药物研发成本;但因体内数据有限,计算 杋模型的构建会受到影响,使得不能准确预测化合物真实参数。目 前,已经有多种商业软件可以用于血脑屏障常用参数的预测,如 ADMETUS、 Chemoffice、 Physico- chemicalpropertypredictors、 Phys Chem等软件可以预测LogP; Chemoffice等软件可以计算化合物 的分子量和分子极性表面积; ADMETUS、 Physico chemicalpropertypredictors、 PhysChem等软件可以预测化合物 的pKa; ADMETpredictor、 ReaDME、 QikProp等软件可预测化合物 B/P和表观渗透系数; CSBBB软件可预测化合物的 LogBB值
3.1计算机模拟 • 计算机模型的测定方法具有廉价、高效及快捷的优点,常用于化合 物库的筛选,极大地节约了药物研发成本;但因体内数据有限,计算 机模型的构建会受到影响,使得不能准确预测化合物真实参数。目 前,已经有多种商业软件可以用于血脑屏障常用参数的预测,如 ADMETUS、Chemoffice、Physico-chemicalpropertypredictors、 PhysChem等软件可以预测LogP;Chemoffice等软件可以计算化合物 的分子量和分子极性表面积;ADMETUS、Physicochemicalpropertypredictors、PhysChem等软件可以预测化合物 的pKa;ADMETpredictor、PreADME、QikProp等软件可预测化合物 B/P和表观渗透系数;CSBBB软件可预测化合物的LogBB值
32体外测定模型 ·体外血脑屏障通透性的测定模型虽然不能精确反映转运蛋 白和酶等因素的影响,但其快速且花费较低,对药物研发早 期的决策具有重要的指导意义。体外测定的常用细胞模型 有犬肾传代(MCK)细胞、人结肠癟-2(Caco-2)细胞、膀胱 癟ECV304/C6细胞模型,以及磷脂膜色谱法(IAM)和平行人 工膜渗透性测试( PAMPA)等非细胞技术
3.2体外测定模型 • 体外血脑屏障通透性的测定模型虽然不能精确反映转运蛋 白和酶等因素的影响,但其快速且花费较低,对药物研发早 期的决策具有重要的指导意义。体外测定的常用细胞模型 有犬肾传代(MDCK)细胞、人结肠癌-2(Caco-2)细胞、膀胱 癌ECV304/C6细胞模型,以及磷脂膜色谱法(IAM)和平行人 工膜渗透性测试(PAMPA)等非细胞技术
测定模型 优点 缺点 MDCK细胞 重现性好;被动运输和外外排转运体表达水 排测定更接近体内情况;平较低,需进行细胞 检测P-糖蛋白外排最灵敏培养,消耗人力多 Caco-2细胞 适合定向进行P-糖蛋白外与BBB差异较大 排测试 ECV304C6细胞具有BBB的主要特征无P-糖蛋白的表达 IAM 与Caco-2等生物膜实验相不能模拟双分子膜 关性良好 的扩散 PAMPA 适用于被动扩散模型,与缺少BBB的转运体; Caco-2模型和体内研究相只能测量血脑屏障 关性好;可以实现高通量的速率,不能预测体 筛选,价格较低 内的BP
·另外,还可以使用离体的脑血管和内皮细胞进行测定,如小 牛脑毛细血管内皮细胞(BMEC)模型等。这些方法较体内测 定模型省时省力,且保留了酶和转运体等特征;但在体外培 养的过程中,转运体表达会逐渐降低,且实验条件缺乏整体 的神经-体液调节机制
• 另外,还可以使用离体的脑血管和内皮细胞进行测定,如小 牛脑毛细血管内皮细胞(BMEC)模型等。这些方法较体内测 定模型省时省力,且保留了酶和转运体等特征;但在体外培 养的过程中,转运体表达会逐渐降低,且实验条件缺乏整体 的神经−体液调节机制