人-鼠嵌合抗体基因工程设计 Pr鼠VH人CH Pr鼠VL人CL % SP20 启动子® 网 CHO 大肠杆菌 免疫球蛋白 抗体分泌细胞 基因载体的构建 鼠VH 鼠VL 一H链嵌合载体 L 链嵌合载体 CL 人CH 共转染细胞 人-鼠嵌合基因工程抗体
Pr 鼠VH 人 CH Pr 鼠VL 人 CL 免疫球蛋白 基因载体的构建 H链嵌合载体 L 链嵌合载体 共转染细胞 启动子 人-鼠嵌合抗体基因工程设计 鼠VH 鼠VL 人CL 人CH 抗体分泌细胞 人-鼠嵌合基因工程抗体 SP20 CHO 大肠杆菌
3.构建嵌合抗体的大致过程： 1)将鼠源单抗的可变区基因克隆出来； 2)构建的包含有人抗体恒定区基因及表达所需 的其它组件（如启动子、增强子、选择标记等）的 表达载体 3)将可变区基因克隆入包 含恒定区的表达载体 4)在哺乳动物细胞（如骨 髓瘤细胞、CHO细胞)中表 构建重组表达载体 达
3.构建嵌合抗体的大致过程： 将鼠源单抗的可变区基因克隆出来； 3）将可变区基因克隆入包 含恒定区的表达载体 2）构建的包含有人抗体恒定区基因及表达所需 的其它组件(如启动子、增强子、选择标记等)的 表达载体 4）在哺乳动物细胞(如骨 髓瘤细胞、CHO细胞)中表 达
① ② Human recombinant TNF Spleen cells are isolated Anti-TNF Ab-producing plasma cell is isolated and ③ Antibody-producing the Ab-coding DNA sequence is purified human plasmacelle Genes Antibody Genes Antibody VL 8 CI CH3CH2 VH CHI CH3CH2 CHI Genes coding for human constant regions(CH,CL) and mouse variant regions (VH,VL)are combined Binds TNF
Genes Antibody Genes Antibody VL VH CHI CH3CH2 CHI Genes coding for human constant regions(CH,CL) and mouse variant regions(VH,VL)are combined Binds TNF Hybrid antibody 70%human,30%mouse Genes Human Mouse ▣ Bound,inactive TNF Genes coding for the hybrid antibody are transfected to E.coli and expanded ⑤ 人 Monoclonal "chimeric" antibodies to TNF are isolated
4.嵌合抗体的鉴定 一.核酸水平 利用PCR或者RT-PCR的方法从转染后的大肠杆菌或CHO细胞中检测目的基因的插入。 二.蛋白水平 WB检测相应细胞是否均有表达产物。 三.免疫水平 用不同抗原包被ELISA板，检测克隆所表达的嵌合抗体与抗原的结合活性。 ELISA鉴定该嵌合抗体是否能与抗人FC抗体相结合
4.嵌合抗体的鉴定 一．核酸水平 利用PCR或者RT-PCR的方法从转染后的大肠杆菌或CHO细胞中检测目的基因的插入。 二. 蛋白水平 WB检测相应细胞是否均有表达产物。 三. 免疫水平 用不同抗原包被ELISA 板,检测克隆所表达的嵌合抗体与抗原的结合活性。 ELISA 鉴定该嵌合抗体是否能与抗人FC抗体相结合