PCR: Polymerase Chain Reaction 30-40 cycles of 3 steps Step 1: denaturation 变 THITTTITIT TITT TUT TITITETTMTTTTT1mu uLLa 延伸 能否成功的 核苷酸引物 DNA和 S TITUTTTITITETTIEITITTIT 长。延伸的温 变性是 关键。 理3s2m时间影响结果 45 seconds54°C forward and reverse 5 primers !!! SMTITITTTHIHTITT TTITTTIMITTITTTTTmm y Step 3: extension 2 minutes72°C only dNTPs Page 16 By Weining
16 By Weining PCR循环（三个阶段） 能否成功的使模板 DNA和PCR产物 变性是反应成败的 关键。 变性 退火(复性） 延伸 退火是使引物和模板 DNA复性。退火 的温度决定PCR的 特异性。 延伸即寡核苷酸引物 的延长。延伸的温 度和时间影响结果。 Page 16
变性 ①模板DNA的变性 0 模板DNA经加热至 94°C1min后,模板 TImIITHTITIHTTTIUITE TITITTMITTTTImTUITm DNA双链即解离成为~ 单链,以便之后引物 结合,为下轮反应作 准备 By Weining
17 By Weining 变性 • ①模板DNA的变性： 模板DNA经加热至 94℃1min后，模板 DNA双链即解离成为 单链，以便之后引物 结合，为下轮反应作 准备
退火 ②模板DNA与引物的 退火(复性):模板 DNA经加热变性成单 S ITTTTTT I TTITTIITE Step 2 链后,温度降至54m 45 seconds54° forward and reverse 45s,以便使引物与模 5 primers !! 板DNA单链的互补序 列配对结合 By Weining
18 By Weining 退火 ②模板DNA与引物的 退火(复性)：模板 DNA经加热变性成单 链后，温度降至54℃ 45s，以便使引物与模 板DNA单链的互补序 列配对结合
延伸 ③引物的延伸:DNA 模板--引物结合物在 TaqDNA聚合酶的作 用下,于72°C左右,mms 以dNTP为反应原料,八八,一 2 mmutes72° DNA序列为模板,按 碱基配对与半保留复 制原理,合成一条新 的与模板DNA链互补 的半保留复制链 By Weining
19 By Weining 延伸 • ③引物的延伸：DNA 模板--引物结合物在 TaqDNA聚合酶的作 用下，于72 ℃左右， 以dNTP为反应原料， DNA序列为模板，按 碱基配对与半保留复 制原理，合成一条新 的与模板DNA链互补 的半保留复制链
PGR动画 过程 auuuuunnle 变性 HHHH 引物退火 H iiiiiim DNA复制 cycle 2nd cycle 3rd cycle By Weining
20 By Weining PCR 动画 1 st cycle 2 nd cycle 3 rd cycle 过 程 变 性 引 物 退 火 DNA 复制